[发明专利]一种转移因子的制备方法及其注射剂的制备方法

说明书

本发明公开了一种转移因子的制备方法，其特征在于，包括预处理、匀浆、反复冻融、离心、乙醇沉淀、一次超滤、病毒灭活、二次超滤、本发明还公开了一种转移因子注射剂的制备方法。本发明采用传统工艺中均未使用的乙醇沉淀法去除各类杂蛋白及病毒灭活法有效去除各种动物源性病毒，能有效保证产品的安全性，减少过敏源，提高安全性；同时经乙醇沉淀去除杂蛋白后可减少后续超滤膜超滤的负荷，延长超滤膜的使用寿命。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体地指一种转移因子的制备方法及其注射剂的制备方法。

背景技术

转移因子Transfer Factor(TF)，又称传输因子，由具有细胞性免疫功能的淋巴细胞产生，通过从冻融致敏的T细胞获得的一种可透析的因子。能加强动物的免疫力，可以将延迟过敏反应能力从一个个体(包括人和动物)转移到另一个体，它们运送父淋巴细胞的抗原特异细胞性免疫(迟发性过敏反应)到未暴露或原生的淋巴细胞。转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息，能够将特异性免疫信息递呈给受体淋巴细胞，使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞，从而激发受体细胞介导的免疫反应。转移因子具有广泛的免疫学调节活性，一方面可诱导免疫细胞活化，增强机体非特异性免疫能力。另一方面能够将特异性免疫能力传递到其他动物，激发动物产生特异性免疫。

由于其特定的作用，转移因子临床用于治疗某些抗生素难以控制的病毒性或霉菌性细胞内感染(如带状疱疹，流行性乙型脑炎，白色念珠菌感染，病毒性心肌炎等)；对恶性肿瘤可作为辅助治疗剂(主要用于肺癌，鼻咽癌，乳腺癌，骨肉瘤等)；免疫缺陷病(如湿疹，血小板减少，多次感染综合症及慢性皮肤粘膜真菌病有较好的疗效)。目前，已公开的关于转移因子注射剂的制备工艺中，通常包括以下方法：(1)用绞肉机或匀浆器将猪脾(牛脾)匀浆，冻融，或超声以破碎细胞；(2)离心；(3)离心液经10000分子量左右的超滤膜超滤的转移因子；(4)根据转移因子的含量加注射用水配制注射制剂。

中国专利申请“一种从牛脾脏中提取转移因子的方法”(专利申请号：200810154335.3)公开生产方法：将冷冻牛脾脏破碎、絮凝、透析、过滤除菌，制成含有转移因子的原液；“一种猪脾转移因子注射液的制备方法”(专利申请号:201310136476.3)公开猪脾转移因子注射液的制备方法：将检验合格后的猪脾脏进行清洗、匀浆、甲醛灭活、冻融破碎，经过滤、超滤后获得原液，加入注射用水得到注射液；“一种猪脾转移因子注射液的生产方法”(专利申请号:201110126248.9)中使用匀浆、低温超声破碎、离心、超滤工艺提取转移因子；“一种转移因子溶液及其制备方法”(专利申请号:201410306339.4)中将猪脾进行清洗、匀浆、反复冻融、调节pH、过滤、超滤后得到转移因子溶液；“一种转移因子的制备方法”(专利申请号:201310640313.9)将新鲜鸡脾进行清洗、匀浆、冻融破碎，经离心加压抽滤、超滤后获得转移因子溶液；“一种猪脾转移因子制备方法”(专利申请号：201310755932.2)包括组织绞碎、均质破碎、微滤、超滤等步骤，采用高压均质机快速破碎细胞。

上述的工艺方法仅用冻融后离心，一方面不能充分有效的去除各类杂蛋白，这样使得产品容易引起过敏反应，不能有效去除各类动物源性病毒，使制剂存在病毒污染和异常毒性不合格的风险；另一方面就是现有的制备方法均使用微滤膜、超滤膜进行过滤，滤膜负荷大，寿命短，成本高，限制了医学上的进一步使用。灭活过程中采用加入甲醛或进行升温处理，甲醛为致癌物，残留的游离甲醛注入人体后产生制激性反应；升温则易使转移因子的活性降低而影响使用效果。注射液中氨基酸、小肽类物质易发生聚合为大分子物质而析出致使制剂不稳定，也易引起相关的副作用。

发明内容

本发明的目的就是要解决上述背景技术的不足，提供一种转移因子的制备方法及其注射剂的制备方法，来减少转移因子中的杂蛋白过敏源，有效去除各类动物源性病毒及延长超滤膜的使用寿命。

本发明的技术方案为：一种转移因子的制备方法：

(1)预处理：将动物脾脏剥离其附着脂肪，用水洗净；