[发明专利]一种快速分离筛选纤维素分解真菌的方法

权利要求书

1.一种快速分离筛选纤维素分解真菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、选择性富集培养与初筛：取样品10g加入至200ml富集筛选培养基中，28℃，150r/min摇瓶培养6～10天，分别吸取样品培养液2ml离心，10000rpm，10min，取500μl用分光光度计检测，测590nm的OD值，选OD值大于0.3的试样为候选含有产纤维素酶菌种的试样，取该试样的菌液作梯度稀释，在PDA平板上分离出单菌落；

B、多孔细胞培养板复筛：将步骤A中分离出的单菌落分别接入多孔细胞培养板的孔中培养，孔中培养基为产酶培养基300μl，28℃，静置培养6天，孔中出现蓝色者为目标菌，将多孔细胞培养板置于离心机中离心，8000rpm，30min，分别吸取各孔上清200μl至另外一个多孔细胞培养板用酶标仪进行检测，测590nm的OD值，选OD值大于1.0的菌株为候选产纤维素酶菌种；

C、平板培养复筛：将步骤B中的候选产纤维素酶菌种在平板复筛培养基上进行划线培养，28℃，静置培养6天，根据菌落显色圈直径与菌落直径的比值大小确定菌种的产酶能力，直径比大于2.2的菌种为最终纤维素酶高产菌株；

D、菌种保存：将目标菌接到PDA平板培养基，28℃静置培养7～14天，观察菌落形态；将目标菌接入YPD液体培养基摇瓶培养，28℃，150r/min，6天，显微镜观察菌体形态一致，将YPD液体培养基摇瓶培养物作甘油保存；即得纤维素分解真菌。

2.根据权利要求1所述的快速分离筛选纤维素分解真菌的方法，其特征在于，所述富集筛选培养基的配方为：(NH₄)₂SO₄10g/l，AZCL-HE-cellulose10g/l，KH₂PO₄10g/l，MgSO₄·7H₂O 1.2g/l，Tween-801.2g/l，ZnSO₄·7H₂O 0.01g/l，MnSO₄·6H₂O 0.01g/l，CuSO₄·7H₂O 0.01g/l，青霉素100U/ml，链霉素0.1mg/ml，pH值为5.0。

3.根据权利要求1所述的快速分离筛选纤维素分解真菌的方法，其特征在于，所述产酶培养基的配方为：AZCL-HE-cellulose 40g/l，酵母提取物10g/l，MgSO₄·7H₂O 1.2g/l，KNO₃6g/l，(NH₄)₂SO₄3g/l，KCl 1.6g/l，KH₂PO₄20g/l，pH值为4.5。

4.根据权利要求1所述的快速分离筛选纤维素分解真菌的方法，其特征在于，所述平板复筛培养基的配方为：马铃薯200g/l，葡萄糖40g/l，AZCL-HE-cellulose 1g/l，阿司匹林0.8g/l，琼脂20g/l，pH值为5.0。