[发明专利]一种基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于癌症相关基因检测领域，更具体本发明以DNAH5基因在结肠癌组织中表达量较正常组织明显下调为基础，涉及一种基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒及DNAH5基因在制备结肠癌诊断试剂盒中的应用，本发明也涉诊断结肠癌的方法。

背景技术

结肠癌是大肠癌的一种，是国内外常见的恶性肿瘤之一，在40-50岁年龄段发病率最高，严重威胁着人类的健康和生命。据世界流行病学调查，发现结肠癌在北美、西欧、澳大利亚、新西兰等地的发病率最高，居内脏肿瘤前二位，但在亚、非、拉美等地发病率则很低。在我国结肠癌的发病率仅次于胃癌、食管癌，占据消化道肿瘤的第3位。近年来随着人民生活水平的提高，饮食结构的改变，结肠癌的发病率呈逐年上升趋势。

结肠癌的发病机制尚未完全阐明，但病因学研究已经表明，绝大部分结肠癌的发生是一个多步骤、多阶段，环境因素和遗传因素共同作用的复杂过程。它的发生发展涉及多个基因的改变，表现为多基因多步骤的协同累积以及相互作用。近些年，高通量测序技术的产生和发展，对基因组学研究带来了革命性的变革，使得大规模、快速、高效检测基因突变成为可能，近年来已广泛地应用于检测疾病相关的突变位点。国内外已应用基因芯片及高通量筛选等技术对结肠癌基因表达谱进行了较多研究。归根结底结肠癌是一种基因病，是体内外环境相互作用的结果，它的发生发展涉及多个基因的改变，导致某些基因表达量增加或降低，如CD44V6的过度表达与消化道肿瘤的淋巴结转移相关，并保护了血管内皮生长因子(VEGF)的促内皮细胞功能，从而促进了肿瘤血管生成和浸润转移；VEGF诱导survivin表达上调，高表达的Survivin抑制了各种指向caspase的凋亡机制，从而保护内皮细胞逃避凋亡。通过上述与结肠癌相关基因表达的检测，可以给结肠癌进行早期诊断提供依据，制备以相应基因为基础的结肠癌诊断试剂盒。

DNAH5(dynein，axonemal，heavy chain 5)基因是参与纤毛或鞭毛运动，基于微管的运动，细胞定位等的基因，目前的研究集中在该基因与肺部或纤毛运动障碍等慢性疾病的相关性方面，而没有关于该基因与结肠癌相关的研究及介绍。

本发明通过对正常组织与结肠癌组织的基因表达的测序分析，得出DNAH5基因在结肠癌组织中的表达量较正常组织明显下调，是影响结肠癌发生发展的关键基因。进一步使用荧光实时定量PCR(QPCR)检测临床样本中的DNAH5基因转录表达情况，可以对结肠癌的发病机理进行探究，该基因转录表达水平可以为制备基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒提供依据，还可以以该基因为基础制备结肠癌诊断试剂盒。

发明内容

本发明通过对结肠癌与正常组织转录组表达进行高通量测序分析和进一步QPCR验证，发现DNAH5基因在结肠癌组织中的表达与在正常组织相比明显下调。通过检测DNAH5基因转录水平的表达情况，可以判断受试者是否患有结肠癌。

本发明的目的在于提供DNAH5基因在制备基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒中的用途及一种基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒。

根据DNAH5基因的在结肠癌组织中转录水平较正常组织明显下调，可以根据这一特点，以DNAH5基因为基础为制备基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒提供依据。DNAH5基因在制备基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于所述诊断试剂盒包含DNAH5基因荧光实时定量PCR的引物对，所述引物分别为：

正向引物序列为5’-GACCACCGAGGCTCATAAGCAGTT-3’，如SEQ ID NO：1所示；

反向引物序列为5’-GCAGGTCTTGGCTGACACCACTATA-3’，如SEQ ID NO：2所示。

本发明的另一目的是提供一种基于DNAH5基因的结肠癌诊断试剂盒，所述试剂盒包含DNAH5基因荧光实时定量PCR的引物对，引物对可以根据引物设计的常规设计原则设计。优选的实施方案中所述引物分别为：

正向引物序列为5’-GACCACCGAGGCTCATAAGCAGTT-3’，如SEQ ID NO：1所示；

反向引物序列为5’-GCAGGTCTTGGCTGACACCACTATA-3’，如SEQ ID NO：2所示。

所述诊断试剂盒还包含扩增管家基因GAPDH引物对，引物对可以根据引物设计的常规设计原则设计。优选的实施方案中所述引物分别为：

正向引物序列为5’-TTTAACTCTGGTAAAGTGGATAT-3’，如SEQ ID NO：3所示；