[发明专利]一种疫苗组合物及其制备方法

说明书

本发明专利申请是申请日为2014年6月18日、申请号为201410272698.2、名称为纳米乳疫苗辅剂的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种疫苗组合物，特别涉及一种包含新型纳米乳疫苗辅剂的疫苗组合物及其制备方法。

背景技术

疫苗辅剂又称免疫佐剂(Adjuvant)，是一类单独使用时一般无免疫原性，但与抗原物质合并使用时能增强抗原物质免疫原性，增强机体免疫应答，或改变机体免疫应答类型的物质。辅剂本质上是一类非特异性免疫增强剂，临床上常在疫苗免疫前单独接种或与疫苗混合后同时接种。辅剂使用在二次免疫后，其免疫的增强作用更加明显。实践证明，疫苗与辅剂的联合应用，不仅可以显著提高疫苗的免疫效果，还可以减低动物机体的免疫耐受性。

现在商业生产上主要有以下几种辅剂，铝盐，改进的微生物产物，脂质体和乳剂。其中铝辅剂主要有氢氧化铝，磷酸铝等，是全世界应用最广泛的辅剂。但该辅剂有很多局限性，如吸附效果低下，需要的量大等。随着现代生物工程基因工程的迅速发展，传统的灭活或活体疫苗的重要性已逐渐降低，然而由基因工程重组抗原或化学合成多肽组成的现代疫苗普遍存在免疫原性弱等问题，因此迫切需要安全又有强活性的辅剂来增强其效力。为改变这种免疫辅剂研究发展的落后局面，在许多发达国家已经开始进行新型辅剂的研究，其中就包含某些纳米乳辅剂的研发。市面上现有的乳剂佐剂以MF59，AS04等为代表，是一类油包水或水包油型乳化剂。对乳剂辅剂的研究表明这是一种不亚于铝辅剂的新型辅剂，其在几个临床前开发和临床试验中表现得甚至更加优异，乙肝、丙肝及HIV亚单位抗原等也在应用新型佐剂进行了大规模的临床实验，比如AS04作为乙肝疫苗佐剂，在欧盟已经取得了上市许可。特别是基于MF59乳剂辅剂的流感疫苗已经上市10年，这是一种利用超高压力匀化作用制备的疫苗辅剂，但这种高能的工艺有很多缺陷，主要表现在：需要特殊的设备进行纳米化如高压均质机，较长的工艺操作时间，大量能量需求和高成本。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种免疫效果好的疫苗组合物，其中所用疫苗辅剂性能优良且成本低的，以克服上述缺点。

本发明通过相转变温度(phaseinversiontemperature(PIT))法制备新型纳米乳疫苗辅剂，关键因素需要确定合适的表面活性剂和合适的HLB值，这样才能在油表面形成支架结构，由水相包裹，形成均匀的纳米级(130～165nm范围)的水油颗粒，并且结构稳定；其次表面活性剂总量需要控制，否则会影响产品的安全性；最后必须有合适的水和油的比例，这样才能确保合适的水油的包裹。最后通过实验设计找到一种合适的相转变温度表面活性剂，确定合适的相转变温度法工艺流程，确定纳米乳化疫苗辅剂的主要质控项目和标准。

为实现上述目的，本发明采取下述技术方案来实现：

一种疫苗组合物，包括一种纳米乳疫苗辅剂和抗原，其中所述疫苗辅剂通过以下步骤制得：以角鲨烯为油相，与两种表面活性剂混合，加入缓冲液为水相，整个体系中，HLB值为8-12，表面活性剂总量范围为8％-20％，水油比例为0.2-0.8；将上述混合物在低于相转变温度下，快速混合搅拌进行初步乳化；然后在一定搅拌速度下进行预加热进一步乳化；将混合物加热至高于相转变温度后进行降温，水相完全包裹油相，最终形成一种颗粒均匀的纳米级疫苗辅剂。

进一步，所述两种表面活性剂分别为吐温和司盘。

优选的，所述两种表面活性剂分别为吐温80和司盘80。

优选的，所述HLB值为9.5。

优选的，所述表面活性剂总量的范围为11％

优选的，所述水油比例范围为0.4。

优选的，所述水相的缓冲液pH值为中性。

作为其中一个实施例，所述抗原为出血热抗原。

其中本发明的核心技术为纳米乳疫苗辅剂的制备方法，具体包括：

1、表面活性剂的选择

通过预测试发现纳米乳剂可以使用相转变温度法得以实现，本发明可以使用不同的Tween(20，40，60，65，80and85)和不同的Span(20，40，60，65，80and85)，使用不同的组合，用相转变温度法均可制备出纳米辅剂，但Tween80和Span80作为表面活性剂效果最好，因此使用Tween80和Span80作为首选表面活性剂，但并不局限于Tween80和Span80。

2、HLB(HydrophileLipophilicBalance，亲水亲油平衡性)的选择