[发明专利]一种基于金杂化ZSM-5分子筛负载电子媒介体构建的三通道生物传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于金杂化ZSM-5分子筛负载电子媒介体构建的三通道生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，分别在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；

（2）在电极表面滴加6 μL浓度为1 ~ 2 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛的水溶液，干燥；

（3）继续将6 μL浓度为8 ~ 12 μg/mL的三个肿瘤标志物抗原的捕获抗体溶液滴加到修饰电极表面，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（4）用3 μL浓度为5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4℃冰箱中孵化1 h，清洗干净；

（5）将6 μL浓度为0.000003 ~ 18 ng/mL的一系列不同浓度的三个肿瘤标志物抗原用于和对应的的捕获抗体的特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净；

（6）将6 μL浓度为1 ~ 2 mg/mL分别为金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三种肿瘤标记物的检测抗体溶液滴在电极上，与对应的三种肿瘤标记物抗原进行特异性识别，室温下孵化1 h，清洗干净，于4℃冰箱中储存备用。

2.如权利要求1所述的一种基于金杂化ZSM-5分子筛负载电子媒介体构建的三通道生物传感器的制备方法，所述金杂化ZSM-5分子筛负载中性红、金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝和金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的三种肿瘤标记物的检测抗体溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）金杂化ZSM-5分子筛的制备

取0.5 ~ 1 gZSM-5分子筛溶于10 ~ 20 mL无水甲苯中，加入0.5 ~ 1 mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，在70℃下回流1.5 h；离心后于110℃下干燥1 h，得到粉末为氨基功能化的ZSM-5分子筛，将50 ~ 100 mg氨基化ZSM-5分子筛溶于10 mL超纯水中，在搅拌下缓缓加入到100 ~ 200 mL金纳米粒子溶液中，溶液立即变为不透明的深紫色，离心，除去上清液，在35℃下真空干燥，得到的紫色固体粉末为金杂化ZSM-5分子筛；

（2）金杂化ZSM-5分子筛负载中性红标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备

取1 mL浓度为1 ~ 2 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与1 mL浓度为10 ~ 20 μg/mL的第一种肿瘤标志物的检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后，继续加入1 mL浓度为1 ~ 2 mg/mL的中性红溶液，继续震荡12 h，离心洗涤后，将沉淀物重新分散在1 mL超纯水中，制得金杂化ZSM-5分子筛负载中性红标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用；

（3）金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备

取1 mL浓度为1 ~ 2 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与1 mL浓度为10 ~ 20 μg/mL的第二种肿瘤标志物的检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后，继续加入1 mL浓度为1 ~ 2 mg/mL的甲苯胺蓝溶液，继续震荡12 h，离心洗涤后，将沉淀物重新分散在1 mL超纯水中，制得金杂化ZSM-5分子筛负载甲苯胺蓝标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用；

（4）金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的肿瘤标记物的检测抗体的制备

取1 mL浓度为1 ~ 2 mg/mL的金杂化ZSM-5分子筛水溶液与1 mL浓度为10 ~ 20 μg/mL的第三个肿瘤标志物的检测抗体混合，震荡12 h，离心洗涤后，继续加入1 mL浓度为1 ~ 2 mg/mL的二茂铁甲酸溶液，继续震荡12 h，离心洗涤后，将沉淀物重新分散在1 mL超纯水中，制得金杂化ZSM-5分子筛负载二茂铁甲酸标记的肿瘤标记物的检测抗体溶液，于4℃冰箱中储存备用。