[发明专利]赭绿青霉及其在制备brefeldin A中的应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及赭绿青霉及其在制备brefeldin A中的应用。

背景技术

Brefeldin A(布雷菲徳菌素A，简称BFA)是一种天然存在的大环内酯类抗生素，化学名[(1R,2E,6S,10E,11as,14aR)-1,6,7,8,9,11a,12,13,14,14a-Decahydro-1,13-dihydroxy-6-methyl-4H-cyclopent[f]oxacyclotridecin-4-one]，分子式为C₁₆H₂₄O₄，分子量为280，结构式如下：

Singleton等于1958年从Penicillium decumben中最早分离得到BFA，但被命名为decumbin。根据他们的研究报告，BFA还被证明对老鼠和金鱼有毒。1962年，Betina等从Penicillium cyaneum中分离出化合物蓝菌素(cyanein)。他们发现该化合物可抑制白色念珠菌、酿酒酵母和人类宫颈癌细胞的生长。其中，对人类宫颈癌细胞生长的平均半抑制增长浓度GI₅₀为10nM。随着时间推移和结构的逐步确立，研究者们后来发现decumbin和cyanein其实为同一化合物，并将其统一命名为brefeldin A(简称BFA)。一系列研究发现：BFA可通过诱导高尔基体分解，从而抑制蛋白质由内质网向高尔基体复合物转运，具有抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、抗有丝分裂、杀线虫等多种生物活性。由于对蛋白质转运、加工过程的影响，所以BFA已经成为了生物学家研究哺乳动物细胞信号传导途径的一种重要分子工具。

一系列研究已经发现：BFA可通过诱导高尔基体分解，抑制蛋白质由内质网向高尔基体复合物的转运过程，具有抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、抗有丝分裂、杀线虫等多种生物活性。由于BFA影响蛋白质转运、加工过程，结果BFA已成为生物学家研究哺乳动物细胞信号传导途径的一种重要分子工具。除此之外，美国肿瘤研究院(NCI)工作人员在抗肿瘤体外筛选时还发现BFA能够诱导肿瘤细胞的分化和凋亡，作为血疗法试剂用于肿瘤治疗具有广阔的应用前景。鉴于BFA的多种生物活性以及潜在的药用价值，研究和开发BFA的工作已经受到越来越多的重视。然而，药源已经成为BFA发展成药的最主要限制因素。

根据已有的文献报道，目前我们发现斜卧青霉(Penicillium decunbens)、布雷正青霉 (Eupenicillium brefeldianum)、苜蓿茎点霉(Phoma medicaginis)、苜蓿叶点霉(Phyllosticta medicaginis)、百日草链格孢菌(Alternaria zinniae)和棒曲霉(Aspergillus clavatus)等菌株均能发酵产生BFA。但是这些菌株大多只能产生少量的BFA，并不能满足生产要求。尽管如此，为提供更多的BFA进行药源研究，美国科学家于1975年提供了苜蓿叶点霉发酵产生BFA的生产工艺，并申请了相关专利(专利号U.S.3896002)。1995年，McCloud等对布雷正青霉ATCC 58665发酵生产BFA进行了相关研究。2005年，我国科学家刘万云等也报道了一株生产BFA的青霉属真菌SHZK-15，但获得的产量仅为151.6mg/L发酵液。2009年，郑裕国等也研究了布雷正青霉变种ZJB082702在发酵制备BFA中的应用，结果申请并获准专利(专利号CN 101445784A)。以上的这些研究都为BFA的工业化生产提供了可能，但由于这些菌种容易退化、发酵水平普遍偏低、副产物较多，难以满足日益增长的商品化生产要求。因此，若能发现BFA优质高产的新菌株，必定能为BFA的生产提供新的选择，为生物制药提供宝贵的菌种资源。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为生物发酵生产BFA提供一种新选择。

本发明的技术方案是一株赭绿青霉Penicillium ochrochloron SWUKD4.211，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国·武汉·武汉大学，430072；保藏日期：2015年1月8日；保藏号：CCTCC M 2015022。

具体的，该菌的5.8s rDNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。