[发明专利]检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测酚酸类化合物的方法，特别是一种检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法。

背景技术

在植物的生命活动过程中，酚酸类物质是重要的次生代谢产物之一。其生物合成主要是通过植物生理过程中的草莽酸途径，并经由植物根系的分泌、地上部分的淋洗、凋落物及有机物的腐解、微生物的活动等多种途径进入土壤，影响土壤中营养物质的有效形态及微生物种群的分布等。有研究认为酚酸类物质在土壤中的积累是使作物产生连作障碍的重要因素之一，随着近些年来我国人工纯林多代连栽生产力下降问题的日益严重，森林土壤酚酸类物质也开始引起众多学者的普遍关注，认为酚类物质可能在土壤中积累，从而使土壤中毒，成为人工林连栽减产的重要原因之一，在南方地区，有关杉木连栽地土壤酚酸物质作用的报道会影响杉木种子发芽和幼苗生长。杉木酚酸物质的鉴定采用的是超临界萃取技术和气相色谱－质谱仪，提取和鉴定过程较为复杂，而且所检测出的酚酸种类有限。近些年来，桉树人工林在南方地区种植广泛，桉树林地土壤中酚酸物质的作用一直缺乏研究，有关桉树林地土壤酚酸物质种类及含量的鉴定方法未见相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法，能够同时检测多种酚酸，检测速度快，准确度高，操作简单。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法，包括以下步骤：

(1)混合酚酸标样制备

分别准确称量1、5、10、50、100mg的对羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、香豆酸、苯甲酸、水杨酸、肉桂酸，用2mL甲醇溶解以上混合物于烧杯中，而后用超纯水定容至100mL，最终配制成酚酸浓度梯度分别为1、5、10、50、100μg·mL^-1的混合标准溶液；

(2)色谱条件设置

采用高效液相色谱仪HPLC,waters-e2695进行测定，检测波长为230nm，分离柱4.00×250mm 5micron，内填luna C₁₈(2)，柱温30℃，流动相为乙腈和0.1％磷酸溶液，进样量20μL，流速为1.5mL·min^-1,采用梯度洗脱方法；

(3)酚酸标样标准曲线的绘制

将对羟基苯甲酸、苯甲酸、香草酸、阿魏酸、肉桂酸、水杨酸和香豆酸7种酚酸混合标样进行HPLC分析，通过对酚酸浓度和图谱峰面积进行线性回归，得到相关线性方程；

(4)林地土壤采集：在林内的上中下坡分别随机抽取3株平均木，呈矩形在平均木周围选取4个取样点，各取样点分别位于平均木与周围3棵树中心，从垂直方向上0-30cm处取土壤并混合作为林间土壤样品；

(5)土壤酚酸物质的提取

称取25g土壤样品，放入50mL离心管中，向其中分别加入25mL 1mol·L^-1NaOH，而后放置过夜，次日，振荡30min，用高速离心机离心，转速为4000r·min^-1，后将过滤离心液用12mol·L^-1盐酸酸化至pH＝2.5,静置2h，出现絮状胡敏酸沉淀后，再次离心除去胡敏酸，而后将上清液过0.22μm滤膜，后统一使用HPLC进行测定；

(6)土壤酚酸物质的检测

采用自动进样器进样，按色谱条件进样测定，记录峰面积，计算得到土壤酚酸的种类和含量。

本发明的方法，具有操作简便，检测速度快，灵敏度高，准确性强，重复性好，检测成本较低，适用于林地土壤对羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、香豆酸、苯甲酸、水杨酸、肉桂酸种类和含量的检测。特别适用于桉树人工林土壤中的酚酸物质种类和含量检测。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

实施例1

本发明所述的检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法，包括以下步骤：

1、七种混合酚酸标准溶液配制及标准曲线绘制方法，包括以下步骤：

(1)分别准确称量1、5、10、50、100mg的对羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、香豆酸、苯甲酸、水杨酸、肉桂酸，用2mL甲醇溶解以上混合物于烧杯中，而后用超纯水定容至100mL，最终配制成酚酸浓度梯度分别为1、5、10、50、100μg·mL^-1的混合标准溶液。