[发明专利]检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法

权利要求书

1.检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)混合酚酸标样制备

分别准确称量1、5、10、50、100mg的对羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、香豆酸、苯甲酸、水杨酸、肉桂酸，用2mL甲醇溶解以上混合物于烧杯中，而后用超纯水定容至100mL，最终配制成酚酸浓度梯度分别为1、5、10、50、100μg·mL^-1的混合标准溶液；

(2)色谱条件设置

采用高效液相色谱仪HPLC,waters-e2695进行测定，检测波长为230nm，分离柱4.00×250mm 5micron，内填luna C₁₈(2)，柱温30℃，流动相为乙腈和0.1％磷酸溶液，进样量20μL，流速为1.5mL·min^-1,采用梯度洗脱方法；

(3)酚酸标样标准曲线的绘制

将对羟基苯甲酸、苯甲酸、香草酸、阿魏酸、肉桂酸、水杨酸和香豆酸7种酚酸混合标样进行HPLC分析，通过对酚酸浓度和图谱峰面积进行线性回归，得到相关线性方程；

(4)林地土壤采集：在林内的上中下坡分别随机抽取3株平均木，呈矩形在平均木周围选取4个取样点，各取样点分别位于平均木与周围3棵树中心，从垂直方向上0-30cm处取土壤并混合作为林间土壤样品；

(5)土壤酚酸物质的提取

称取25g土壤样品，放入50mL离心管中，向其中分别加入25mL 1mol·L^-1NaOH，而后放置过夜，次日，振荡30min，用高速离心机离心，转速为4000r·min^-1，后将过滤离心液用12mol·L^-1盐酸酸化至pH＝2.5,静置2h，出现絮状胡敏酸沉淀后，再次离心除去胡敏酸，而后将上清液过0.22μm滤膜，后统一使用HPLC进行测定；

(6)土壤酚酸物质的检测

采用自动进样器进样，按色谱条件进样测定，记录峰面积，计算得到土壤酚酸的种类和含量。