[发明专利]表达重组抗体CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法

权利要求书

1.一种表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，所述方法包括如下步骤：

1)通过细胞诱导凋亡剂处理传代次数不超过15代的表达重组抗体的CHO细胞系，得到诱导凋亡后的CHO细胞系；

2)然后对凋亡后的CHO细胞系进行胞内重组抗体的荧光染色并进行流式细胞术检测及分析；

3)根据胞内流式细胞术分析的结果，计算平均荧光强度和荧光强度分布峰型图，通过荧光强度分布峰型图和CHO细胞系的产量的相关性，及所述峰型图确定CHO细胞系的稳定性。

2.根据权利要求 1所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，在步骤1)中，所述细胞诱导凋亡剂选自放线菌素D、GF-109203X、咖马林、冈田酸、咖啡因和十字胞碱中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述细胞诱导凋亡剂为放线菌素D。

4.根据权利要求3所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述放线菌素D的使用浓度为5μM，处理时间为16h。

5.根据权利要求1所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述步骤2)通过包括以下步骤的方法进行：

(1)通过固定剂处理所述诱导凋亡后的CHO细胞系，得到固定后的CHO细胞系；

(2)然后通过破膜剂处理所述固定后的CHO细胞系，得到破膜后的CHO细胞系；

(3)再将破膜后的CHO细胞系进行细胞免疫荧光染色和流式细胞术分析。

6.根据权利要求1所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述步骤2)通过包括以下步骤的方法进行：

(1)通过固定剂和破膜剂同时处理所述诱导凋亡后的CHO细胞系，得到固定破膜后的CHO细胞系；

(2)再将固定破膜后的CHO细胞系进行细胞免疫荧光染色和流式细胞术分析。

7.根据权利要求 5或6所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，在步骤(1)或(2)中，所述固定剂选自甲醇、乙醇、丙酮和多聚甲醛中的一种或多种；所述破膜剂选自Triton-100、NP-40、Tween 20、Saponin、Digitonin和Leucoperm中的一种或多种。

8.根据权利要求 7所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述固定剂为多聚甲醛，所述破膜剂为tritonX-100，并且所述固定剂和破膜剂均溶于PBS溶液中。

9.根据权利要求5或6所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述固定剂的体积百分比浓度为2～4％，所述破膜剂的体积百分比浓度为0.1～0.2％。

10.根据权利要求 1所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，在步骤2)中，所述细胞免疫荧光染色所使用的荧光标记抗体为抗重组抗体。

11.根据权利要求 10所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述抗重组抗体选自羊或鼠或兔抗人IgG Fc段的单克隆抗体、多克隆抗体，以及羊或鼠或兔抗人轻链的单克隆抗体、多克隆抗体中的一种或多种。

12.根据权利要求 11所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，所述抗重组抗体，优选地，为荧光二抗FITC标记的羊抗人Kappa轻链抗体。

13.根据权利要求1所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，在步骤3)中，所述平均荧光强度通过对荧光强度分布峰型图积分得到。

14.根据权利要求1所述的表达重组抗体的CHO细胞系稳定性的早期鉴定方法，其特征在于，在步骤3)中，所述确定CHO细胞系的稳定性具体包括如下步骤：

A)分析同一克隆不同代次之间胞内平均荧光强度和克隆产量的相关性；和/或分析不同的克隆的胞内平均荧光强度和克隆的相对产量的高与低，来确定CHO细胞系的稳定性；

B)通过步骤A)中分析同一克隆或不同克隆的荧光强度分布峰型图为单峰、双峰来确定CHO细胞系的稳定性。