[发明专利]一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒及其使用方法，属于生物材料及检测技术领域。

背景技术

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，也是妇科肿瘤死亡率最高的肿瘤类型。目前，卵巢癌的诊断主要依据两种检测手段。一种是经阴道超声检查（TUV），这种成像方法可用于检查女性的生殖器官，包括子宫、卵巢、宫颈及阴道。尽管其应用较为普遍，但是这种方法并不能准确检测出肿块是良性还是恶性。此外，该方法还需要经验丰富的临床技师对检测结果进行解读。另一种常规检测方法是检测生物标志物CA125（carbohydrate antigen 125），这种方法被视为卵巢癌诊断的“金标准”。但是，CA125的特异性及敏感度较低，容易出现假阴性或假阳性。大约50%的卵巢癌I期患者并没有CA125水平升高的现象，也就是说有一半的卵巢癌患者可能被漏诊。某些良性卵巢疾病也会导致CA125水平升高，造成假阳性。因此，在临床诊断上亟需一种更好的诊断标志物及检测工具以尽早诊断卵巢癌。人附睾蛋白4（HE4）是一种新的肿瘤标志物，88%的卵巢癌患者都会出现HE4升高的现象，其可用于卵巢癌的早期诊断、鉴别、治疗监测及预后评估。与CA125相比，HE4的敏感度更高、特异性更强，尤其是在疾病初期无症状阶段，疾病早期HE4诊断的敏感度是82.7%，而CA125却仅有45.9%。与CA125较低的特异性相比，HE4的特异性高达99%。这意味着，临床医生对HE4的检测结果会更具信心。

因此，如何对HE4进行快速有效的高灵敏检测成为研究热点，目前HE4的检测方法主要为生物酶联法(参见文献：S. Wang, X. Zhao, I. Khimji, R. Akbas, W. Qiu, D. Edwards, D. W. Cramer, B. Ye, U. Demirci, Lab Chip. 2011, 11, 3411.)及电化学发光免疫检测（参见文献：J. J. Yang, M. Sa, M. Huang, J. J. Yang, Z. Y. Xiang, B. Liu, A. G. Tang, Clin Biochem. 2013, 46, 1705.），然而这些技术或多或少都存在着缺陷，譬如样品准备繁琐，检测时间长以及检测灵敏度并不高等，目前这两种方法的检测限大约在10 pg.ml^-1水平（参见文献：F. Plotti, S. Capriglione, C. Terranova, R. Montera, A. Aloisi, P. Damiani, L. Muzii, G. Scaletta, P. Benedetti-Panici, R. Angioli, Tumor Biology. 2012, 33, 2117.），而疾病早期时HE4浓度极低，这就对HE4抗原的高灵敏准确检测提出了挑战。表面增强拉曼光谱（SERS）是一种具有极高灵敏度的检测表面物种信息的光谱技术，其在贵金属Au、Ag、Cu上的增强可达10⁶倍以上。自1974年Fleischmann在粗糙银电极上获得了吡啶吸附的高质量拉曼光谱以来(参见文献：S M. Fleischmann, P. J. Hendra, A. J. McQuillan, Chem. Phys. Lett. 1974, 26, 163.)，ERS在表面科学中迅速崛起，目前在生物医学、食品卫生、催化等各领域都得到了广泛的应用。同时，金包覆的铁氧化物功能性核壳纳米粒子（铁氧化物@Au）兼具内核铁氧化物的强顺磁性和外层Au的高SERS活性，已成为理想的SERS基底材料，利用其有效的磁富集作用进行现场极低浓度物质的检测具有极大的潜力。

发明内容

本发明的目的是针对现有人附睾蛋白检测存在的灵敏度较低的不足，提供一种基于表面增强拉曼光谱及磁性能的复合磁性材料实现人附睾蛋白的高灵敏检测的试剂盒及其使用方法。通过SERS技术使检测限达到飞克级水平，并实现了磁性免疫复合纳米粒子的循环使用。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒，它的有效成分包括按体积比为1:1的标记免疫金纳米粒子试剂和Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂；