[发明专利]一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒，其特征在于它的有效成分包括按体积比为1:1的标记免疫金纳米粒子试剂和Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂；

所述的标记免疫金纳米粒子的制备方法为：制备质量体积比为0.6%～1%的粒径为35～50 nm的金纳米粒子分散液，取浓度为1mmol/l的4-巯基苯甲酸标记分子2 μl加入到1 ml的金纳米粒子分散液中，离心分散后，按摩尔比2～5:1，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，进行表面羧基活化处理后，注入人附睾蛋白抗体，孵育2～3 h，再进行离心分散,加入牛血清白蛋白封闭剩下的活性位，得到标记免疫金纳米粒子试剂；

所述的核壳结构Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子的制备方法为：制备质量体积比为15～20%的Fe₃O₄分散液，取浓度为1mmol/l的氨丙基三甲基硅烷 90～100 μl加入到1 ml的Fe₃O₄分散液中，得到表面氨基化修饰的Fe₃O₄；按质量比5～10:1,将粒径为2～5nm的金纳米粒子加入到表面氨基化修饰的Fe₃O₄分散液中混合，得到Fe₃O₄- Au纳米复合物；利用种子生长法制备得到Fe₃O₄@Au核壳纳米粒子；注入浓度为5mg/ml的人附睾蛋白抗体8～10μl，得到核壳结构Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂。

2.如权利要求1所述的人附睾蛋白免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将标记免疫金纳米粒子试剂、Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂与待测抗原混合，组装形成 “标记免疫金纳米粒子-抗原-Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子”磁性复合夹心结构；

（2）将磁性复合夹心结构通过钕铁硼磁铁富集后转移至载玻片，用于进行表面增强拉曼光谱检测。

3.根据权利要求2所述的人附睾蛋白免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于：以酸化甲醇溶液为解离剂，解离磁性复合夹心结构，实现免疫磁性纳米粒子的循环使用。

4.根据权利要求3所述的人附睾蛋白免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于：所述的酸化甲醇溶液，甲醇的质量浓度为25%，用HCl调节甲醇溶液的pH为2～3。