[发明专利]一种制备花青素苷标准品的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物化学领域，具体涉及一种制备花青素苷标准品的方法。

背景技术

花青素苷(anthocyanin)是由花青素(anthocyanidin)和糖经糖苷键缩合而成的水溶性色素，存在于植物表皮细胞的液泡中，呈现橙色、红色至蓝色，是决定被子植物花、果实、种子、叶等器官颜色的重要色素之一。在花瓣中，花青素苷伴随着花的发育进程逐渐积累，在花瓣发育的晚期，花青素苷大量生成。营养缺乏、紫外辐射、低温、霜冻、干旱等环境因子都会诱导花青素苷的合成和积累。花青素苷易吸收可见光和紫外光、有效消除光合电子传递系统产生的活性氧自由基、调节细胞渗透势、保护细胞膜，减缓可见光和紫外光引起的光抑制、光损害，在植物光破坏等逆境防御中起到重要作用。国内外许多研究表明，花青素苷不仅可呈现出红、黑、兰、紫、橙等多种艳丽的颜色，还具有抗氧化、抗突变、抗癌、抗炎、降血糖、降血脂、减肥、改善视力等多种活性功能，在食品、保健品、医药、生物工程及化工领域有广阔的应用前景。随着人们生活水平的提高和对天然植物性来源的无毒无害的有利于保护人们身体健康、防病治病的天然有机物质的追求，以及人工合成色素对人体有较大的毒副作用，高效无毒的天然阳离子花青素活性苷元及其提取方法已成为21世纪新兴前沿研究课题。

红山茶组(Section camellia)物种多，已发表的名称有72种、1亚种、7变种和1变型，是山茶属(Genus Camellia)中种类最多的类群。滇山茶(Camellia reticulata)、怒江山茶(C.saluenensis)和山茶(C.japonica)是红山茶组植物中分布面积和被人类作为观赏植物开发利用最早最多的物种。开红花的茶梅(C.sasanqua)也是山茶属中较早得到利用的物种。目前，世界各国以上述4个物种为育种材料，已选育出上万个山茶花园艺品种。这些山茶花的花色艳丽多彩，花朵优雅多姿，冬春开放，花期长，是世界闻名的观赏花卉，目前为止仅供观赏绿化利用。

山茶花的寿命长达数百年，耐贫瘠土壤，可在山区、半山区种植。花瓣大、数量多，红色花瓣中含有种类丰富的花青素苷色素，是制备花青素苷标准品的理想材料。但是现有利用红花山茶提取分离花青素苷的技术一般只是得到含花青素的原液产物或粗提取物，无法对不同种类的花青素苷进行区别化分离纯化，提取物中，非花青素苷杂质太多，总花青素苷含量低，各种花青素苷组分的构成不清楚，虽然可以作为食品天然色素食用，但很难充分发挥花青素苷固有的生理功能，无法直接应用于医药、生物工程、化工等领域。

发明内容

本发明提供一种制备花青素苷标准品的方法，本发明采用红花山茶的花瓣为主要原料，可针对不同种类的山茶花对应的提取分离不同类型的花青素苷，获得花青素苷单体种类丰富，同时，本发明制备的花青素苷单体纯度高，稳定性好，可作为标准品直接应用于食品、医药、生物工程、化工等领域。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种制备花青素苷标准品的方法，制备花青素苷标准品的方法按照以下步骤进行：

1)红花山茶的花瓣采集

在山茶花的开花期间，采集红色、颜色鲜艳的花朵，剔除雌雄蕊和花瓣以外的杂质，待提取花青素苷用，在花瓣采集精选的过程中，尽量防止花瓣受到损伤、褐化；

2)制备花青素苷原液

①将采集到的花瓣放入带盖的玻璃或塑料容器中，稍微用手压实后，再继续加入花瓣，加到容器口下方2-3cm处；

②用纯度为98％以上的醋酸和乙醇，以1:1的比例混合均匀获得50％醋酸乙醇溶液；向盛有花瓣的容器中加入50％醋酸乙醇溶液，加入到容器高度的四分之三位置处；溶液加好后用竹棒搅动花瓣，使花瓣充分浸泡在溶液中，将盖子盖好后在室温下浸泡12-24h，滤出提取液；

③再在容器中加入50％醋酸乙醇溶液，按步骤②的方法对容器内的山茶花的花瓣再进行浸提2次,并收集每次的滤液；

④将3次浸提收集的滤液充分混合，在40℃下减压浓缩，蒸发提取液中的水、乙醇和醋酸，在蒸馏瓶中残留的物质即为花青素苷原液，作为柱层析分离花青素苷单体使用；

3)花青素苷的分离和纯化

根据所提取标准物质的需要，选择不同的山茶花野生种或或园艺品种为提取原料，对不同化学结构花青素苷类型进行分离和纯化。

作为优选，所采用的山茶花的提取原料为滇山茶、怒江山茶、山茶和茶梅及其园艺品种中的任一种。