[发明专利]可删除筛选标记基因的植物表达载体及其用途

权利要求书

1.可删除筛选标记基因的植物表达载体，其特征在于：该载体包括Cre/Loxp系统；该Cre/Loxp系统为在2个loxP位点间构建ipt基因表达元件和Cre重组酶表达元件。

2.如权利要求1所述的植物表达载体，其特征在于：所述的载体还包括目标基因表达元件，该表达元件从5’至3’方向依次包括启动子、目标基因和终止子。

3.如权利要求1或2所述的植物表达载体，其特征在于：所述ipt基因具有如SEQ ID No.1所述的核苷酸序列。

4.如权利要求1～3任一项所述的植物表达载体，其特征在于：Cre重组酶的编码基因中加入了枳早期结瘤素样基因PtBCP1的内含子，具有如SEQ ID No.2所述的核苷酸序列。

5.如权利要求1～4任一项所述的植物表达载体，其特征在于：所述的Cre/Loxp系统具有如SEQ ID No.3所述的核苷酸序列。

6.含有权利要求1～4任一项所述植物表达载体的宿主细胞。

7.如权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞为农杆菌。

8.权利要求1～5任一项所述植物表达载体或权利要求6～7任一项所述宿主细胞在制备无筛选标记基因的转基因植物中的用途。

9.快速获得无选择标记转基因柑橘的方法，包括如下步骤：

a、遗传转化：将构建好的可删除标记基因的植物表达载体转化农杆菌，采用农杆菌介导法对1～1.5cm柑橘上胚轴茎段进行侵染，侵染后茎段接种在MS+2mg/L BA+0.5mg/LIAA+1mg/L 2,4-D+0.1mmol/L AS共培养基上，共培养2～3天后转移到含500mg/L carb的MS再生培养基中继续培养；

b、嫁接：在MS培养基中培养10～20天后可观察到再生芽的萌发，25～35天后再生芽可长至0.5～1cm，进行试管茎尖嫁接，嫁接苗继续培养10～20天后可长至2cm，提取嫁接苗叶片DNA，进行PCR检测，获得无选择标记转基因植株。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：步骤b中所述的试管茎尖嫁接操作如下：将封口用的石蜡带封口膜切成0.1～0.2cm宽、拉成2～3cm长的带状，于纯酒精中浸泡过夜，嫁接前，从酒精中捞出平铺在灭菌培养皿于超净台上吹干酒精备用；把再生芽插入砧木的劈口处后，用准备好的石蜡带将砧木切口与接芽接处的地方包缠2圈，继续置于MS培养基上培养。