[发明专利]一种肿瘤抗原性植物蛋白

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种肿瘤抗原性植物蛋白。

背景技术

由于癌症目前不能进行早期检测，而肿瘤抗原的确定对肿瘤免疫治疗具有重要意义，已有报道发现不同种属的同类基因表现为一定的同源性，生物亲缘关系越远，其免疫性越强。据此，人们便期望能发现一类异种同源的肿瘤抗原性物质，并利用它检测人体内肿瘤抗体，实现癌症早期诊断的目的。

发明内容

本研究从低等植物地衣中提取了一种植物蛋白，通过免疫印迹法(Westen Blotting)证实了该种蛋白具有肿瘤抗原性，可以作为早期肿瘤诊断的标记物。

本发明的目的是提供一种肿瘤抗原性植物蛋白，将该蛋白命名为植物蛋白，该植物蛋白具有肿瘤相关抗原性。

一种肿瘤抗原性植物蛋白，该蛋白由SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成，该蛋白可用于肿瘤的检测，也可用于制备抑制肿瘤生长的药物。

制备该肿瘤抗原性植物蛋白的方法：

(1)称取40g地衣组织，捣碎，再分别用液氮研磨和超声波破碎法进行破碎，破碎后离心，用磷酸盐缓冲液溶解上清液；

(2)用蒸馏水或磷酸盐缓冲液冻融法对取得的地衣组织细胞进一步破碎，细胞破碎后离心取上清；

(3)硫酸铵盐析对蛋白进行粗提，加硫酸铵盐至20％饱和度，离心取上清后加硫酸铵盐至40％饱和度，离心，沉淀用等量的1mmol/L，ph6.8的磷酸缓冲液溶解，可得20％-40％的硫酸铵沉淀粗蛋白，离心后上清加硫酸铵盐至60％饱和度，离心，沉淀用等量的1mmol/L，ph6.8的磷酸缓冲液溶解，可得40％-60％的硫酸铵沉淀粗蛋白；

(4)上述两种粗蛋白经初步检测后，将含目的蛋白的提取液经滤膜过滤后，通过sephadex25脱盐柱进行脱盐；

(5)脱盐后，上吸附性HA柱，以离子强度不断增加的ph6.8，含不同浓度Nacl的磷酸盐缓冲液洗脱，分步收集，用SDS-PAGE蛋白电泳检测收集的各浓度洗脱液中目的蛋白；

(6)用考马斯亮蓝试剂盒检测所得的纯的蛋白的浓度，-70℃保存备用。

进一步，上述步骤均在避光和不高于4℃的条件下进行。

进一步，步骤(2)中离心为4℃，5000r/min，15min。

提取出的纯的植物蛋白蛋白经N端测序得到SEQ ID NO：1的蛋白序列。

该植物蛋白在癌症早期检测中的应用。

该植物蛋白在抗癌药物中的应用。

经证实，该植物蛋白与人乳腺癌细胞、胃癌细胞、肺鳞癌细胞、人结肠癌细胞、子宫颈癌细胞、人肝癌细胞、人肾癌细胞的细胞破碎物均能有效结合，证实该植物蛋白具有多种肿瘤抗原的特性。

附图说明

图1是该植物蛋白的SDS-PAGE电泳图。

图2是该植物蛋白与七种肿瘤标志物结合的western-blot图。

具体实施方式

实施例1.植物蛋白蛋白的制备

称取40g地衣组织，研钵捣碎，再分别用液氮研磨和超声波破碎法进行破碎，破碎后离心，用磷酸盐缓冲液溶解上清液；用磷酸盐缓冲液冻融法进一步对取得的组织液的细胞进行破碎，在4℃，5000rpm，经离心15min，取上清液；加入硫酸铵至20％饱和度，4℃过夜，5000rpm离心10min，在上清液中加入硫酸铵至40％饱和度，4℃过夜，5000rpm离心10min，收集沉淀，用1mmol/L磷酸缓冲液溶解，溶解沉淀，得到20％-40％硫酸铵沉淀粗蛋白。在上述上清液中继续加入硫酸铵至60％饱和度，4℃过夜，5000rpm离心10min，收集沉淀，沉淀用等量的1mmol/L磷酸缓冲液溶解，得40％-60％硫酸铵沉淀粗蛋白，本实施例对40％-60％硫酸铵沉淀粗蛋白进行进一步分离纯化。