[发明专利]一种肿瘤抗原性植物蛋白有效
申请号: | 201510038320.0 | 申请日: | 2015-01-23 |
公开(公告)号: | CN104650200B | 公开(公告)日: | 2018-05-01 |
发明(设计)人: | 郑振海;郑新文 | 申请(专利权)人: | 郑新文;郑振海 |
主分类号: | C07K14/415 | 分类号: | C07K14/415;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/34;A61K38/16;A61P35/00 |
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地址: | 050000 河北省石家庄*** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 肿瘤 抗原性 植物蛋白 | ||
1.一种肿瘤抗原性植物蛋白,其特征在于:该蛋白由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。
2.制备权利要求1所述肿瘤抗原性植物蛋白的方法:
(1)称取40g地衣组织,捣碎,再分别用液氮研磨和超声波破碎法进行破碎,破碎后离心,用磷酸盐缓冲液溶解上清液;
(2)用蒸馏水或磷酸盐缓冲液冻融法对取得的地衣组织细胞进一步破碎,细胞破碎后离心取上清;
(3)硫酸铵盐析对蛋白进行粗提,加硫酸铵盐至20%饱和度,离心取上清后加硫酸铵盐至40%饱和度,离心,沉淀用等量的1mmol/L,ph6.8的磷酸缓冲液溶解,可得20%-40%的硫酸铵沉淀粗蛋白,离心后上清加硫酸铵盐至60%饱和度,离心,沉淀用等量的1mmol/L,ph6.8的磷酸缓冲液溶解,可得40%-60%的硫酸铵沉淀粗蛋白;
(4)上述两种粗蛋白经初步检测后,将含目的蛋白的提取液经滤膜过滤后,通过sephadex25脱盐柱进行脱盐;
(5)脱盐后,上吸附性HA柱,以离子强度不断增加的ph6.8,含不同浓度Nacl的磷酸盐缓冲液洗脱,分步收集,用SDS-PAGE蛋白电泳检测收集的各浓度洗脱液中目的蛋白;
(6)用考马斯亮蓝试剂盒检测所得的纯的蛋白的浓度,-70℃保存备用。
3.根据权利要求2所述的制备肿瘤抗原性植物蛋白的方法,其特征在于:上述步骤均在避光和不高于4℃的条件下进行。
4.根据权利要求2所述的制备肿瘤抗原性植物蛋白的方法,其特征在于:步骤(2)中离心为4℃,5000r/min,15min。
5.权利要求1所述植物蛋白在制备抗癌药物中的应用。
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