[发明专利]一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法

权利要求书

1.一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)重组菌株初筛：将经过低能离子注入介导秦艽总基因组DNA转化处理后的出发酵母菌株接种至YPD固体培养基上进行培养得到转化子，提取转化子基因组DNA，以转化子基因组DNA为模板，针对MECT基因、MECPS基因以及GGPPS基因的特异性片段分别进行三轮PCR扩增，并分别对扩增产物进行核酸电泳分析，根据电泳分析结果从转化子中筛选得到同时含有MECT基因片段、MECPS基因片段以及GGPPS基因片段的重组酵母菌株；

2)重组菌株复筛：将步骤1)筛选得到的重组酵母菌株于YPD液体培养基中进行发酵培养，通过对发酵培养所得发酵液进行HPLC分析筛选得到产龙胆苦苷重组酵母菌株。

2.根据权利要求1所述一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法，其特征在于：采用上游引物F1和下游引物R1对所述MECT基因的特异性片段进行PCR扩增，上游引物F1的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，下游引物R1的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。

3.根据权利要求1所述一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法，其特征在于：采用上游引物F2和下游引物R2对所述MECPS基因的特异性片段进行PCR扩增，上游引物F2的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示，下游引物R2的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。

4.根据权利要求1所述一种快速筛选产龙胆苦苷重组酵母菌株的方法，其特征在于：采用上游引物F3和下游引物R3对所述GGPPS基因的特异性片段进行PCR扩增，上游引物F3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示，下游引物R3的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示。