[发明专利]一种葡萄糖敏感自律式胰岛素释放微凝胶载体及其制备方法

权利要求书

1.一种葡萄糖敏感自律式胰岛素释放微凝胶载体，其特征在于：所述的葡萄糖敏感微凝胶由3-丙烯酰氨基苯硼酸、N-异丙基丙烯酰胺、含乙烯基功能性基团的RGD小分子多肽三种单体经自由基聚合得到。

2.根据权利要求1所述的葡萄糖敏感自律式胰岛素释放微凝胶载体，其特征在于：3-丙烯酰氨基苯硼酸5-15mol%、含乙烯基功能基团的亲水性RGD多肽5-15mol%、N-异丙基丙烯酰胺60-85mol%。

3.一种葡萄糖敏感自律式胰岛素释放微凝胶载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）葡萄糖敏感微凝胶的制备：称取单体3-丙烯酰氨基苯硼酸5～15 mol%、含乙烯基功能基团的亲水性RGD多肽5～15 mol%、N-异丙基丙烯酰胺60～85 mol%及交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺1～6 mol%，并量取100 mL蒸馏水，加入到装有冷凝装置、氮气导管、恒压滴液漏斗和磁力搅拌子的三口烧瓶中，开启搅拌，通入氮气30 min，加热至60～80 ^oC，通过恒压滴液漏斗加入引发剂过硫酸胺1～5 mol%，转速为1000 r/min，氮气环境下反应24 h制备微凝胶，将微凝胶装入透析袋，浸入到蒸馏水中透析，每24 h更换蒸馏水，共3次，将透析后的微凝胶高速离心10 min，弃去上层清液，经冷冻干燥后得到葡萄糖敏感微凝胶；

所述的离心转速为12000 r/min；

所述透析袋的截留分子量为8000～14000；

（2）载药胰岛素微凝胶的制备：称取步骤（1）制得的微凝胶40 mg，加入到浓度为 20 mg/mL的胰岛素溶液中，置冰箱4 ℃中平衡48 h 后，12000 r/min高速离心10 min，弃去上层清液，沉淀物用4 ℃的稀盐酸清洗，去掉吸附在微凝胶表面上的胰岛素，微凝胶经冷冻干燥后得到载药微凝胶。

4.如权利要求3所述的一种葡萄糖敏感自律式胰岛素释放微凝胶载体的制备方法，其特征在于：步骤（1）中的含乙烯基功能基团的亲水性RGD多肽按如下步骤制备：

（1）称取2-氯三苯甲基氯树脂，装入多孔过滤漏斗多肽合成装置中，用溶剂二甲基甲酰胺（DMF）洗涤2～3次，然后加入DMF浸泡树脂30 min，最后排出溶剂DMF；

（2）称取氨基及侧基上羧基分别被9-芴甲氧羰基和叔丁基保护的天冬氨酸于试管中，用DMF将其溶解，然后将该溶液转入步骤（1）中合成装置中，再加入催化剂N,N-二异丙基乙胺，室温下让氨基及侧基上羧基分别被9-芴甲氧羰基和叔丁基保护的天冬氨酸与树脂相互作用30 min，使氨基及侧基上羧基分别被9-芴甲氧羰基和叔丁基保护的天冬氨酸充分固定在树脂上；

（3）用DMF洗涤步骤（2）的树脂4～5次，并用茚三酮检验缩合反应是否完全；

（4）加入20％哌啶-二甲基甲酰胺溶液到步骤（3）的树脂中，充分反应脱去天冬氨酸上的芴甲氧羰基保护基；

（5）用DMF洗涤步骤（4）的树脂4～5次；

（6）称取氨基被9-芴甲氧羰基保护的甘氨酸于试管中，用DMF溶解，加入缩合剂1-羟基苯并三唑、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐及催化剂N,N-二异丙基乙基胺，并将该溶液转入到步骤（5）树脂中，让甘氨酸的C端羧基与天冬氨酸的N端氨基充分缩合；

（7）用DMF洗涤步骤（6）所得的树脂4～5次，并用茚三酮检验缩合反应是否完全；（8）加入20％哌啶-二甲基甲酰胺溶液到步骤（7）树脂中，充分反应脱去甘氨酸上的芴甲氧羰基保护基；

（9）用DMF洗涤步骤（8）的树脂4～5次；

（10）称取氨基及侧基上胍基分别被9-芴甲氧羰基和2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基保护的精氨酸于试管中，加入缩合剂1-羟基苯并三唑、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐及催化剂N,N-二异丙基乙基胺，并将该溶液转入到步骤（9）的树脂中，让精氨酸的C端羧基与甘氨酸的N端氨基充分缩合；

（11）用DMF洗涤步骤（10）所得树脂4～5次，并用茚三酮检验缩合反应是否完全；

（12）加入20％哌啶-二甲基甲酰胺溶液到步骤（11）的树脂中，充分反应脱去精氨酸上的芴甲氧羰基保护基；

（13）用DMF洗涤步骤（12）的树脂4～5次；

（14）称取丙烯酸于试管中，加入缩合剂1-羟基苯并三唑、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐及催化剂N,N-二异丙基乙基胺，并将该溶液转入到步骤（13）树脂中，让丙烯酸的羧基与精氨酸的N端氨基充分缩合；

（15）用DMF洗涤步骤（14）所得的树脂4～5次；

（16）用甲醇和二氯甲烷分别洗涤步骤（15）所得的树脂2～3次，将其干燥；

（17）加入脱保护剂三氟乙酸、三异丙基硅烷和蒸馏水到步骤（16）制备的树脂中，脱去叔丁基得到含乙烯基功能基团的RGD小分子多肽，所述脱保护剂三氟乙酸、三异丙基硅烷和蒸馏水的体积比为95:2.5:2.5。