[发明专利]无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器的制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及采用一种快速、灵敏检测瘦肉精的无标记电致化学发光免疫传感器的制备方法和应用，属于新型纳米功能材料与生物传感器技术领域。

背景技术

瘦肉精是一类叫做β－兴奋剂的药物，而不是某一种特定的药物。这类药物具有实现促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的功能，所以统称为“瘦肉精”。根据国务院食品安全委员会办公室《“瘦肉精”专项整治方案》（食安办〔2011〕14号）规定的“瘦肉精”品种目录为16种，包括：莱克多巴胺Ractopamine；克伦特罗Clenbuterol；沙丁胺醇Salbutamol；硫酸沙丁胺醇Salbutamol Sulfate；盐酸多巴胺Dopamine Hydrochloride；西马特罗Cimaterol；硫酸特布他林Terbutaline Sulfate；苯乙醇胺APhenylethanolamine A；班布特罗Bambuterol；盐酸齐帕特罗Zilpaterol Hydrochloride；盐酸氯丙那林Clorprenaline Hydrochloride；马布特罗Mabuterol；西布特罗Cimbuterol；溴布特罗Brombuterol；酒石酸阿福特罗Arformoterol Tartrate；富马酸福莫特罗Formoterol Fumatrate。

瘦肉精可以提高猪的瘦肉率，但如果人们食用含有大量瘦肉精的猪肉后，会造成心血管系统的损坏，并可能出现严重的神经症状。针对瘦肉精中毒事件频发这一严重现象，2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，农业部分别下发文件禁止食品动物禁止使用β－兴奋剂类药物作为饲料添加剂（农业部176号、193号公告、1519号条例）。

目前，检测瘦肉精的方法有高效液相色谱法HPLC、气相色谱－质谱法GC-MS和酶联免疫法ELISA。这些方法，虽具有一定的灵敏度，但存在样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，或者重现性差等缺点，在实际应用中受到一定的限制。

电化学发光免疫传感器由于其灵敏度高、特异性好、操作简便等优点被广泛应用于临床诊断、药物分析、环境监测等领域。制备性能优越的电化学发光免疫传感器，其最关键技术就是发光强度及稳定性和免疫分子的有效固定及重现性等性能的提高。

鲁米诺–过氧化氢Luminol-H₂O₂发光体系由于成本低廉、发光强度高，已被广泛应用到电致化学发光的分析方法中，但由于Luminol-H₂O₂发光体系的发光需要借助一定的催化剂，才能有快速、灵敏、高强度的光信号响应，因此一般常加入辣根过氧化物酶HRP来进行催化反应。而HRP的使用对反应条件要求苛刻，不利于Luminol-H₂O₂发光体系的普及使用。因此开发新型纳米材料模拟酶来代替HRP，会相比于HRP具有较宽泛的使用条件。另外，贵金属纳米材料具有比表面积大、易于与多种生物分子（核酸、蛋白质和生物分子等）结合、对人体无害等特点，可被应用于电致化学发光免疫传感器的制备中。

为了解决上述问题，本发明采用以光化学合成方法，直接在电极上实现了TiO₂ NPs负载的核壳结构的金银钯合金纳米棒-壳聚糖复合材料TiO₂-Au@Ag-Pd NDRs-CHS，使之与TiO₂ NPs的复合材料共同修饰的电极，一方面增加了电极比表面积，增强电极导电能力和抗体的负载量，提高传感器的检测限，另一方面二者可以产生协同催化作用，可以无需使用H₂O₂，仅利用水溶液中的溶解氧即可使鲁米诺产生电致化学发光，并且该体系具有更好的催化响应速度和电致化学发光强度。由此，成功的发明了无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器的制备方法。

发明内容

本发明的目的在于避免现有检测方法中存在的仪器设备复杂、操作过程繁琐及对检验人员的技能要求高等缺点，提供了一种快速、灵敏检测瘦肉精的无标记电致化学发光免疫传感器的制备方法，所制备的传感器具有灵敏度高、特异性强的特点，且制备简单、操作方便，可应用于瘦肉精的快速、灵敏检测。

本发明采用的技术方案如下：

1. 无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤为：