[发明专利]无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器的制备方法和应用

权利要求书

1.无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤为：

（1）以直径4 mm的玻碳电极为工作电极，在电极表面滴涂5~10 uL 二氧化钛纳米粒子溶胶TiO₂ NPs，室温下晾干后，滴涂5~10 μL的金银纳米棒-壳聚糖复合材料Au@Ag NRs-CHS溶液，并在室温下晾干；

（2）将步骤（1）中得到的电极超纯水清洗，室温下晾干成膜，表面滴涂5~10uL 0.01 mol/L 的氯钯酸溶液H₂PdCl₄，立刻使用高压汞灯照射30~90秒，制得TiO₂ NPs负载的金银钯合金纳米棒-壳聚糖复合材料TiO₂-Au@Ag-Pd NDRs-CHS修饰的工作电极，室温下晾干；

（3）将步骤（2）中得到的电极用超纯水清洗，室温下晾干后，将电极浸入到EDC/NHS溶液中，1小时后取出；

（4）将步骤（3）中得到的电极用超纯水清洗，在电极表面滴涂5~10 μL 10 μg/mL的瘦肉精抗体溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干；

（5）将步骤（4）中得到的电极用超纯水清洗，继续在电极表面滴涂5~10μL 100 μg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，4 ℃ 冰箱中晾干成膜，制得无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器；

所述的TiO₂ NPs为1mg/mL 的二氧化钛纳米粒子水溶液；

所述的Au@Ag NRs-CHS为金@银核壳纳米棒与壳聚糖复合材料的水溶液，所述金@银核壳纳米棒是以棒状金纳米粒子为核、以银纳米粒子为壳层的核壳结构的棒状纳米粒子，所述棒状纳米粒子的长度为20~50nm，所述壳聚糖为将壳聚糖纯品加入到体积分数为1% 的醋酸中制备而成的壳聚糖水溶液；

所述的H₂PdCl₄为pH值为1~2的氯钯酸水溶液；

所述的Au@Ag-Pd NDRs 为金银钯合金纳米棒，所述的金银钯合金纳米棒为金@银钯核壳枝晶状的纳米棒，所述金@银钯核壳枝晶状的纳米棒是以棒状金纳米粒子为核、以枝晶状银钯合金纳米粒子为壳层的核壳结构的纳米粒子，所述纳米棒的长度为20~50nm；

所述的EDC/NHS为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基丁二酰亚胺NHS的混合溶液，所述混合溶液中EDC的浓度为0.01mol/L，NHS的浓度为0.002mol/L。

2.一种如权利要求1所述的制备方法所制备的无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器，所述的无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器应用于瘦肉精的检测，其特征在于，检测步骤为： 

（1）标准溶液配制：配制一组包括空白标样在内的不同浓度的瘦肉精标准溶液，底液为pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液；

（2）工作电极修饰：将本发明所述的无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器为工作电极，将步骤（1）中配制的不同浓度的瘦肉精标准溶液分别滴涂到工作电极表面，4 ℃ 冰箱中保存； 

（3）工作曲线绘制：将饱和甘汞电极作为参比电极，铂丝电极作为辅助电极，与步骤（2）所修饰好的工作电极组成三电极系统，连接到电致化学发光设备上；在电解槽中先后加入15mL pH=7.4的PBS缓冲溶液和1mL 5 mmol/L的鲁米诺溶液luminol；用循环伏安法对组装的工作电极施加循环电压；根据所得的电致化学发光的光信号强度与瘦肉精抗原标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线；空白标样的光信号强度记为D₀，含有不同浓度的瘦肉精标准溶液的光信号强度记为D_i，响应光信号强度降低的差值为ΔD = D₀-D_i，ΔD与瘦肉精标准溶液的质量浓度C之间成线性关系，绘制ΔD－C工作曲线；

（4）瘦肉精的检测：用待测样品代替步骤（1）中的瘦肉精标准溶液，按照步骤（2）和（3）中的方法进行检测，根据响应光信号强度降低的差值ΔD和工作曲线，得到待测样品中瘦肉精的含量。

3.如权利要求1所述的无标记电致化学发光瘦肉精免疫传感器的制备方法，其特征在于所述瘦肉精选自下列之一：莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗、盐酸齐帕特罗、盐酸氯丙那林、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、酒石酸阿福特罗、富马酸福莫特罗。