[发明专利]一种检测平头炭疽菌的环介导等温扩增引物组合物及其应用

权利要求书

1.SEQ ID NO.1所示的Rpb1基因序列作为检测靶标在检测平头炭疽菌中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于SEQ ID NO.1所示的Rpb1基因序列作为检测靶标在LAMP检测平头炭疽菌中的应用。

3.一种用于LAMP检测平头炭疽菌的引物组合物，其特征在于由SEQ ID NO.2所示的正向外引物Rpb1-F3，SEQ ID NO.3所示的反向外引物Rpb1-B3，SEQ ID NO.4所示的正向内引物Rpb1-FIP，SEQ ID NO.5所示的反向内引物Rpb1-BIP，SEQ ID NO.6所示的环引物Rpb1-LF组成。

4.权利要求3所述的引物组合物在检测平头炭疽菌中的应用。

5.权利要求3所述的引物组合物在制备平头炭疽菌检测试剂中的应用。

6.一种用于检测平头炭疽菌的LAMP试剂盒，其特征在于包含权利要求3所述的引物组合物。

7.根据权利要求6所述的LAMP试剂盒，其特征在于包含检测溶液，每毫升所述的检测溶液通过以下方法制备得到：0.8μM正向内引物Rpb1-FIP、0.8μM反向内引物Rpb1-BIP、0.1μM正向外引物Rpb1-F3、0.1μM反向外引物Rpb1-B3、0.1μM环引物Rpb1-LF、1.4mMdNTPs、8mMMgSO₄、0.8M甜菜碱、0.8M Tris-HCl(pH8.8)、0.4mM KCl、0.4mM(NH4)₂SO₄、4％Triton X-100、8U·μL^-1Bst DNA polymerase，加入超纯水制备成1mL检测溶液。

8.根据权利要求6或7所述的LAMP试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还含有染料SYBR Green I。

9.一种LAMP检测平头炭疽菌的方法，其特征在于包括取18μL权利要求7所述的检测溶液，3μL灭菌去离子水，加入4μL待检DNA溶液，总体积为25μL进行LAMP反应；反应程序为：62℃，70min；扩增后加入染料SYBR Green I作为反应指示剂，肉眼观察，以SYBR Green I的颜色变化和荧光强弱做为结果判定标准：在常光下，黄绿色表示检测为阳性，即有平头炭疽菌存在，橙色表示检测结果为阴性，即不含有平头炭疽菌，或所含平头炭疽菌未达检测限。