[发明专利]一种山羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种弱毒疫苗及其制备方法和用途，特别涉及一种山羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途，本发明属于兽医生物制品领域。

背景技术

羊痘病毒(Capripoxvirus,CPV)为痘病毒科脊椎动物痘病毒亚科羊痘病毒属成员。该属成员有山羊痘病毒(Goatpox virus,GTPV)、绵羊痘病毒(Sheep pox virus,SPV)和牛结节性疹块病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)。羊痘是由羊痘病毒引起的一种急性、接触性传染病，被世界动物卫生组织(FAO/OIE)列为93种必须报告的动物疫病之一，我国将其列为一类传染病。其发病率可达75％以上，死亡率可达50％以上，羔羊死亡率可达100％，同时还可导致母羊流产。羊痘是古老的疾病之一，1879年Hansen首次报道了挪威的山羊痘。后来，陆续在世界其他地区报道了该病。广泛分布于非洲、中东、印度次大陆、北欧、地中海各国及德国、澳大利亚、美国等,特别是非洲北部、中东和亚洲的部分国家流行较为严重。与我国接壤的周边国家，如印度、孟加拉、尼伯尔、巴基斯坦、俄罗斯、蒙古等不少国家均有本病的流行。近几年我国的江苏、广东、贵州、山东、浙江、广西、甘肃、黑龙江等地均有本病流行。该病的爆发和流行使家畜的生产力下降，活畜及畜产品贸易停滞，给养羊业的发展造成极大的经济损失。

羊传染性脓疱病(Contagious ecthyma,CE)又名羊传染性脓疱性皮炎(Contagious pustular dermatitis)，俗称“羊口疮(Orf)”，是由副痘病毒成员羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染引起山羊、绵羊和人的一种急性、接触性和嗜上皮性的人兽共患传染病,以在患羊的口唇、蹄、乳房、外阴等处皮肤和黏膜形成红斑、丘疹、脓疮、溃疡和疣状厚痂为特征。世界动物卫生组织(OIE)将该病列为需申报类动物疾病，我国将其列为一类动物疫病。该病最早发现于欧洲，目前，几乎在所有养羊国家和地区均存在。自然情况下主要侵害绵羊和山羊，山羊较为多发。此外，骆驼、牛、鹿、麝牛、猫、幼犬、猴和人均有易感性。本病常呈群发性流行的趋势，3～6月龄羔羊最易感染，常引起群体发病，尤其是饲养密集的羊群。范春 玲等报道了我国2006年在北京市亚福动物养殖中心暴发该病，该病传播速度快，发病率高达95.4％。近年来随着肉羊产业的发展和羊频繁流动，该病时有发生，甚至在一些大型种羊场都有该病的流行，给养羊业带来了巨大的经济损失，严重危害肉羊产业的健康发展。更为严重的是，此病可以通过伤口感染饲养人员，感染者表现为手背、指间和前臂部疱疹和破溃。例如2005年8月福建省永安市有8名羊场养殖工人因感染羊传染性脓疱病毒而发病。可见，羊传染性脓疱不但严重危害肉羊产业的健康发展，而且威胁人类的身体健康，是一种危害较为严重的人畜共患传染病。

近年来，国内外羊痘、羊口疮频繁爆发，而羊痘、羊口疮尚无有效的治疗方法，免疫接种是预防羊口疮唯一行之有效的措施。目前尚无一种能够一针防两病的山羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗。目前羊痘、羊口疮疫苗的研发和应用主要集中在常规疫苗，如灭活疫苗和细胞弱毒疫苗，以及新型疫苗，如囊膜亚单位疫苗、核酸疫苗和重组疫苗上。但是目前，羊痘、羊口疮新型疫苗的研制还处于试验阶段，且新型疫苗往往制备过程繁琐、技术要求高，应用于临床还有很长一段路要走。羊痘、羊口疮灭活疫苗虽然国内外学者均有研究，但其免疫效果有限，从未真正应用于临床。目前，在临床上应用较为广泛的仍然是羊痘、羊口疮弱毒疫苗，因为它具有用量少，能诱导机体产生较强的细胞免疫和体液免疫能力，且产生免疫保护力的时间持久的特点。在国内，虽然羊口疮弱毒疫苗在青海省畜牧兽医科学院兽医研究所和甘肃省畜牧兽医研究所均有研制，但其生产工艺复杂、落后，冻干保护剂不耐热等诸多生产工艺瓶颈问题，是该疫苗无法量产，目前该疫苗处于有品无苗的局面。另外，该弱毒都是上世纪80年代前后的毒株，目前国内流行毒可能发生变异，很难保证其免疫的有效性。山羊痘弱毒疫苗在国内几家疫苗厂家均有生产，但该疫苗生产过程需要羊睾丸原代细胞，冻干保护剂不耐热等工艺问题，使该疫苗生产、运输及保存成本过高。山羊痘、羊口疮病毒二联细胞弱毒疫苗研究，尚属空白。国内外学者现已证实，羊痘弱毒疫苗对处于同科的羊口疮病毒具有部分交叉免疫保护。因此，研制一种抗原谱广、免疫原性好、制苗工艺简单的山羊痘、羊口疮病毒二联细胞弱毒疫苗，对预防国内羊痘、羊口疮爆发和流行具有一加一大于二的现实意义。