[发明专利]以Gemini表面活性剂反胶束从菠萝皮中萃取分离菠萝蛋白酶的方法

权利要求书

1.以Gemini表面活性剂反胶束从菠萝皮中萃取分离菠萝蛋白酶的方法，包括将干净的菠萝皮与pH值为5.5～6.5的磷酸缓冲溶液混合粉粹后，经渣汁分离，取得粗酶液；将粗酶液与甘氨酸-氢氧化钠缓冲液和反胶束混合进行前萃取，再将前萃取取得的上层有机相与HAC-NaAC缓冲液混合进行后萃取，最后将后萃取取得的下层水相冷冻干燥，得到纯菠萝蛋白酶；其特征在于：

所述反胶束由季铵盐Gemini表面活性剂和正己烷、正己醇、水混合组成；所述季铵盐Gemini表面活性剂在反胶束中的浓度为0.01g/mL～0.03g/mL；

所述前萃取是将NaCl浓度为0.05～0.2M、pH值为8～10.5的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液与粗酶液混合后再与反胶束以等体积比混合振荡后，经离心分离取上层有机相；

所述后萃取是将KBr浓度为0.25～1M 、pH值为3.8～4.2的HAC-NaAC缓冲液与有机相等体积比混合振荡后，离心分离取下层水相；

所述冷冻干燥是将下层水相在压强为50±2Pa、温度为-60℃～-55℃下冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：在反胶束中，正己烷和正己醇的体积比为6～9.5:1，水与季铵盐Gemini表面活性剂的摩尔比为10～20:1。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于：所述季铵盐Gemini表面活性剂在反胶束中的浓度为0.025g/mL～0.03g/mL。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述前萃取中，所述甘氨酸-氢氧化钠缓冲液和粗酶液的混合体积比为22～25:1。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于前萃取时，所述甘氨酸-氢氧化钠缓冲液中NaCl的浓度为0.1M。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于后萃取时，所述HAC-NaAC缓冲液中KBr的浓度为0.25～0.5M。