[发明专利]一种法氏囊病毒效价的测定方法

权利要求书

1.一种法氏囊病毒效价的测定方法，其特征在于：其包括以下步骤：

1) 细胞传代：将培养48小时的用于铺板的细胞倒去培养液，用磷酸盐缓冲液将细胞洗两遍后，加入胰酶消化液进行消化，然后加入与倒去的培养液等体积的营养液，混合均匀，得到细胞原液；

2) 消化后细胞原液细胞计数及细胞原液的最终稀释：将步聚1）的细胞原液取出一部分，稀释后，加入细胞计数板中进行计数，并换算出细胞原液的密度；

再根据细胞原液的密度，将细胞原液稀释至细胞密度为2-3×10⁵个细胞/ml的细胞稀释液，待用；

3) 铺细胞板并培养：将上述细胞稀释液加入96孔细胞培养板中，每孔加细胞稀释液100ul，然后将细胞培养板置于37℃二氧化碳培养箱中培养24h，待用；

4) 病毒的稀释：取法氏囊病毒液，用不含血清的营养液逐步稀释，得到10^-6，10^-7，10^-8的法氏囊病毒稀释液；

5）细胞板换液并加病毒液培养观察：将步骤3）中培养24h的96孔细胞培养板倒去废液，然后将10^-6，10^-7，10^-8的法氏囊病毒稀释液加入96孔细胞培养板中，每个稀释度加6孔，每孔100ul，然后将细胞培养板置于37℃二氧化碳培养箱中培养96 h；

6）细胞病变观察及结果判定：上述细胞培养板培养96h后，观察细胞病变，以100%的细胞病变作为判定标准，计算病毒效价TCID₅₀/0.1mL。

2.根据权利要求1所述的一种法氏囊病毒效价的测定方法，其特征在于：所述的步骤1）中胰酶消化液的质量浓度为0.25-0.3%。

3.根据权利要求1所述的一种法氏囊病毒效价的测定方法，其特征在于：所述的步骤1）加入的胰酶消化液完全浸没细胞。

4.根据权利要求1所述的一种法氏囊病毒效价的测定方法，其特征在于：所述的步骤2）具体操作为：取步聚1）的细胞原液1-1.5ml，稀释3-5倍，然后取30-35ul稀释后的细胞原液，加入细胞计数板中进行计数，并换算出细胞原液的密度。