[发明专利]1‑芘基‑碳酰肼的合成及其衍生物在糖蛋白特异性预染检测法中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及糖蛋白特异性荧光预染检测技术，具体地说是1-芘基-碳酰肼(UGF202)的设计合成及其衍生物在糖蛋白特异性荧光预染检测法中的应用。

背景技术

蛋白质糖基化修饰在生命科学研究领域具有至关重要的作用，作为最主要和普遍的蛋白质翻译后修饰之一，目前已知哺乳动物蛋白质中至少有二分之一发生了糖基化，这些糖蛋白广泛分布于组织、细胞、体液中，特别是在细胞膜表面、体液等中含量丰富，糖基化对于蛋白质的折叠、运输和定位等都起着重要作用，并参与受体激活、信号转导、细胞载附等诸多重要的生物过程。糖蛋白数量变化或糖链结构的改变，都可能导致疾病发生。不但目前已知的很多疾病的诊断标志物是糖蛋白，而且通过国际标准认证的药物中，糖蛋白也占到较高的比例。

分离纯化及鉴定是糖蛋白研究的重要步骤，是下一步结构分析得以实施的基础，目前凝胶上蛋白质染色主要分为预染及后染两类。前者在电泳前对样品进行处理，使染料特异性地与样品内糖蛋白相结合，经电泳分离之后即可在相应激发波长下进行观察，后染主要对电泳后的蛋白凝胶进行特异性染色。

目前糖蛋白检测领域试剂盒主要集中于后染，且多数产品均以高附加值的价格在市场销售，价格高昂，不利于生物技术基础研究的发展。尤其国内利用现有的生物试剂进行生物实验成本居高不下，无法实现经济效益与实验共同发展。糖蛋白特异性荧光预染检测技术鲜有报道。本发明开发的UGF202及其衍生物荧光预染检测方法灵敏度与经典的Pro-Q Emerald300染色法一致，是一种灵敏、便捷、特异的糖蛋白荧光预染检测技术，有较好的基础与临床意义。

发明内容

本发明的目的在于提供UGF202的合成及其衍生物在糖蛋白特异性预荧光检测中的应用。

本发明所述的UGF202相关化合物是指UGF202阴离子为母核的钠盐、钾盐和铵盐等。

UGF202母核为：

为了实现本发明的目的，本发明还提供了应用UGF202进行糖蛋白特异性荧光预染检测的方法包括如下步骤：

1)在1-20μL含0.5-10μg蛋白样品(不足1-20μL用重蒸水补足)中加入0.005-0.05M高碘酸水溶液1-20μL，置于避光处进行氧化反应2-20min；优选的样品体积为10μL，优选的高碘酸摩尔浓为0.03M，体积为10μL，优选的反应时间是5min；

2)在反应液中加入0.1-0.3M抗坏血酸1-10μL，摇匀反应0.1-5min；优选的抗坏血酸摩尔浓度是0.24M，体积为5μL，优选的反应时间是0.5min；

3)在反应液中加入UGF202或其衍生物按重量体积比1-5％二甲基亚砜溶液1-5μL，室温下反应5-20min；优选的UGF202或其衍生物溶液为含重量体积是0.5％，体积为2.5μL，优选的反应时间是10min；

4)在反应液中加入10-50μL 3X蛋白质上样缓冲液，摇匀；优选的体积为30μL；

5)电泳，观察。

前期研究表明该技术有如下优点：

1)灵敏度高：UGF202糖蛋白特异性荧光预染检测法灵敏度同Pro-Q Emerald 300灵敏度相当；

2)操作简单迅速：省去后染必需的固定等操作步骤，可在15min内完成；电泳结束后即可观察；

3)重现性好：受温度、摇床摆动频率等外部条件影响较小；

4)可逆性好：容易脱色；

5)质谱兼容性好：由于UGF202荧光预染检测法不影响蛋白质结构，所以可与MALDI-TOF等质谱仪高度兼容；

6)使用安全：采用毒性低的染料，提高实验操作的安全性，对环境污染小；

7)成本低。

附图说明

图1.UGF202化学结构；