[发明专利]1‑芘基‑碳酰肼的合成及其衍生物在糖蛋白特异性预染检测法中的应用有效
申请号: | 201510027542.2 | 申请日: | 2015-01-16 |
公开(公告)号: | CN104529834B | 公开(公告)日: | 2017-09-19 |
发明(设计)人: | 王旭;玄元虎;周阿益;郁冬冬;洪国赢;朱忠欣;丛维涛;金利泰 | 申请(专利权)人: | 温州医科大学 |
主分类号: | C07C281/06 | 分类号: | C07C281/06;C09K11/06;G01N21/64 |
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地址: | 325035 浙江省温州市瓯海经*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 芘基 碳酰肼 合成 及其 衍生物 糖蛋白 特异性 检测 中的 应用 | ||
1.一种凝胶上糖蛋白特异性荧光预染检测法,其包括步骤:
1)在1-20μL含0.5-10μg蛋白样品中加入0.005-0.05M高碘酸水溶液1-20μL,置于避光处进行氧化反应2-20min;
2)在反应液中加入0.1-0.3M抗坏血酸1-10μL,摇匀反应0.1-5min;
3)在反应液中加入UGF202或其衍生物按体积比0.1-5%二甲基亚砜溶液1-5μL,室温下反应5-20min,其中,
UGF202是具有下列化学结构的化合物:
衍生物是UGF202的钠盐、钾盐或铵盐;
4)在反应液中加入10-50μL 3X蛋白质上样缓冲液,摇匀;
5)电泳,观察。
2.权利要求1所述的方法,其中蛋白样品不足1-20μL用重蒸水补足。
3.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中蛋白样品体积为10μL:所加高碘酸水溶液体积为10μL,摩尔浓度为0.03M,避光反应。
4.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中所加抗坏血酸溶液体积为5μL,摩尔浓度为0.24M。
5.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)所加UGF202或其衍生物溶液为按体积比0.5%的二甲基亚砜溶液2.5μL。
6.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤4)向反应液中加入30μL 3X蛋白质上样缓冲液。
7.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)氧化时间为5min。
8.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)反应时间为0.5min;步骤3)反应时间为10min。
9.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤5)是在激光扫描仪下观察染色后的糖蛋白。
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