[发明专利]乙型肝炎病毒感染合并酒精性脂肪肝小鼠模型的构建方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎病毒感染合并酒精性脂肪肝小鼠模型的构建方法，其特征是包括对小鼠依次进行乙型肝炎病毒感染、酒精饮食诱导喂养，其中：所述小鼠选择FVB/N小鼠；所述乙型肝炎病毒感染是通过尾静脉向小鼠体内注射含有HBV全基因组1.3拷贝的pGEM4Z质粒；所述酒精饮食诱导喂养是采用酒精浓度依次递增的3个阶段对病毒感染处理后的小鼠进行酒精饮食诱导喂养和酒精灌胃处理，其中：

3个阶段的酒精饮食诱导喂养为：首先采用酒精浓度为1%的酒精液体饲料对病毒感染处理后的小鼠进行4-7天的第一阶段的酒精诱导喂养，其中酒精液体饲料的用量为5-6ml/只小鼠/天；接着采用酒精浓度为3%的酒精液体饲料对病毒感染处理后的小鼠进行4-7天的第二阶段的酒精诱导喂养，其中酒精液体饲料的用量为5-6ml/只小鼠/天；然后采用酒精浓度为5%的酒精液体饲料对病毒感染处理后的小鼠进行5-7周的第三阶段的酒精诱导喂养，其中酒精液体饲料的用量为5-6ml/只小鼠/天；

酒精灌胃处理为在第三阶段的酒精诱导喂养过程中对小鼠每周进行一次酒精灌胃处理，其中第一周对小鼠采用95%食用酒精灌胃一次，其中95%食用酒精的用量为50ul/只/次；第二周对小鼠采用95%食用酒精灌胃一次，其中95%食用酒精的用量为50ul/只/次；第三周对小鼠采用95%食用酒精灌胃一次，其中95%食用酒精的用量为80ul/只/次；第四周对小鼠采用95%食用酒精灌胃一次，其中95%食用酒精的用量为80ul/只/次；第五周对小鼠采用95%食用酒精灌胃一次，其中95%食用酒精的用量为100ul/只/次；第六周对小鼠采用95%食用酒精灌胃一次，其中95%食用酒精的用量为100ul/只/次。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征是所述质粒的注射量为1-50μg。

3.如权利要求2所述的构建方法，其特征是将1-50μg的所述质粒溶解于PBS缓冲溶液中后再进行所述尾静脉注射。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征是所述PBS缓冲溶液与小鼠的重量比为7-10：100。

5.如权利要求3所述的构建方法，其特征是所述尾静脉注射是在6-8秒内将所述的质粒经尾静脉注射入小鼠体内。

6.如权利要求1-5任一所述的构建方法，其特征是还包括病毒感染监测步骤，对乙型肝炎病毒感染后的小鼠进行眦静脉采血，测定血清中HBeAg水平，然后再进行所述的酒精饮食诱导喂养。

7.如权利要求6所述的构建方法，其特征是于尾静脉注射所述质粒后24h，对小鼠进行眦静脉取血，测定血清中HBeAg水平。

8.如权利要求1-5任一所述的构建方法，其特征是所述酒精饮食诱导喂养是采用酒精液体饲料对病毒感染处理后的小鼠进行喂养，诱导形成酒精性脂肪肝小鼠。