[发明专利]一种引物对及其用于检测Apom基因启动子区-724位点的方法

说明书

技术领域

本发明涉及疾病相关位点检测领域，具体的说，涉及一种引物对及其用于检测Apom基因启动子区-724位点的方法。

背景技术

目前全世界糖尿病患者的数量已达3.66亿，全球每7秒种就有一人死于糖尿病。糖尿病是指以血糖增高为主要临床表现的慢性代谢性疾病，主要分为1型糖尿病和2型糖尿病，2型糖尿病占糖尿病患者90％以上。1型糖尿病是一种自体免疫疾病，是由于免疫系统对分泌胰岛素的胰腺β细胞作出攻击导致胰腺不能分泌足够的胰岛素。而2型糖尿病是由于各种致病因素导致组织器官产生胰岛素抵抗，即胰岛素相对缺乏，故通常临床上用胰岛素释放实验来区别糖尿病的类型。患者试验空腹及进食75克葡萄糖后30分钟、60分钟、120分钟和180分钟分别抽血测定胰岛素及C肽水平。若空腹胰岛素及C肽低于正常，且进食后不增高考虑为1型糖尿病；若空腹胰岛素及C肽低于正常、增高或降低，且进食后增高，则考虑为2型糖尿病。

2型糖尿病具体的致病原因仍然未知，现在的研究发现其是由遗传因素和环境因素共同作用导致的，其中遗传因素约占30％,环境因素约占70％。2型糖尿病的遗传风险是由多个基因共同决定的，目前为止,公认的2型糖尿病易感基因已经增至20个,同时还发现了13个影响空腹血糖的基因以及5个影响餐后血糖的基因。临床常规检查例如空腹及餐后血糖、糖化血红蛋白、C肽水平只能判断2型糖尿病的发生发展情况，但无法找到致病根源，无法根据这些指标做出及时的预防。

发明内容

针对现在临床常规检查存在的问题与不足，本发明提供一种引物对及其用于检测Apom基因启动子区-724位点的方法，克服了无法根据临床常规指标做出及时预防的难题。本发明根据检测Apom基因启动子区-724位点的具体状况作为2型糖尿病健康管理的主线，监控疾病的发生发展，该检测方法操作简单、检测结果可靠准确，进而做到及早预防，早发现，早治疗甚至避免疾病的发生。

为了实现上述目的，本发明提供一种引物对，所述引物对是根据一个2型糖尿病相关基因的序列设计的，所述的2型糖尿病相关基因为ApoM基因，所述的引物对用于检测ApoM基因启动子区-724位点。

较佳的，所述引物对是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

所述引物对用于检测Apom基因启动子区-724位点的方法包括如下步骤：

a.提取样品的全基因组DNA；

b.根据所述引物对对提取的基因组DNA进行PCR扩增，然后对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，以2000bp mark为标尺，根据扩增片段大小,确定检测目的片段并回收纯化；

c.对纯化后的检测目的片段进行测序，分析测序结果检测ApoM基因启动子区-724位点的状况，判断所述ApoM基因启动子区-724位点正常与否。

其中步骤b中回收纯化包括制胶、上样、电泳、割胶、溶胶、柱平衡、转移、漂洗、洗脱回收、浓度与纯度检验的步骤。

较佳的，所述柱平衡的步骤之前有一个柱预处理的步骤。

较佳的，所述洗脱回收的步骤中洗脱体积不小于30μ1,这样做对回收效率有较好的影响。

所述洗脱回收的步骤中洗脱液为ddH₂O，为了得到较好的洗脱效率，PH值控制在7.0-8.5之间。

所述洗脱回收的步骤得到的产物保存在-20℃，以防止其分解。

有益效果：本发明首次发现了ApoM基因的启动子区-724位点是2型糖尿病易感位点，并根据ApoM基因设计特异性的引物，以来自人的组织、全血样本提取全基因组DNA模板进行PCR扩增，并对扩增产物进行测序，设计巧妙、操作简单、检测结果可靠准确，根据该易感位点的具体状况作为2型糖尿病健康管理的主线，监控疾病的发生发展。如果是2型糖尿病遗传倾向较高的人群，及时预防2型糖尿病的外在致病因素，并按时完善预防性的相关的检查，例如空腹、餐后血糖，做到及早预防，早发现，早治疗甚至避免疾病的发生。

具体实施方式

为更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例作进一步说明。

1.基因组DNA提取:

1.1试剂和仪器: