[发明专利]同时检测烯草酮CLE和氯酯磺草胺EDP残留的试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及蔬菜农药残留免疫学快速检测技术领域，具体的说是一种同时检测烯草酮CLE 和氯酯磺草胺EDP残留的试纸条及其制备方法。

背景技术

烯草酮CLE)和氯酯磺草胺EDP是新型旱田苗后除草剂，具有优良的选择性，适用于大豆、油菜、棉花、花生等阔叶田防除野燕麦、马唐、狗尾草、牛筋草、早熟禾、硬草等禾本科杂草，施药后能被禾本科杂草茎叶迅速吸收并传导至茎尖及分生组织，抑制分生组织的活性，破坏细胞分裂，最终导致杂草死亡。近年来，由于农业病虫害流行，烯草酮CLE和氯酯磺草胺EDP作为除草剂，成为应用范围最多的药物。在农业生产中，由于不合理的使用剂量和不遵守休药期造成蔬菜中烯草酮和氯酯磺草胺残留，其残留对蔬菜可产生毒性作用。我国和欧盟分别对烯草酮和氯酯磺草胺在组织中残留也制定了最高残留限量MRL。为了控制烯草酮和氯酯磺草胺残留，保障农产品健康，有必要建立一种快速、有效的残留检测方法对其残留进行监测。

现有的烯草酮和氯酯磺草胺残留检测的方法主要为高效液相色谱HPLC分离，紫外和质谱检测的仪器方法。虽然仪器方法在鉴定药物种类和定量分析上表现出良好的性能，但由于其操作复杂、分析费用昂贵，而不适用于对大量样品进行残留筛选。ELISA方法灵敏度高、成本低，在药物残留检测中应用也很广泛，但该方法需要酶标仪等实验室设备，分析时间长，在应用中有局限性。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时检测烯草酮CLE 和氯酯磺草胺EDP残留的试纸条及其制备方法，以解决现有烯草酮和氯酯磺草胺在蔬菜残留检测时检测费用高昂，不适用于对大量样品进行残留筛选的问题。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案为：

一种同时检测烯草酮CLE 和氯酯磺草胺EDP残留的试纸条，试纸条为胶体金免疫层析试纸条，它包括背板、吸水垫、硝酸纤维膜、结合垫、样品垫，所述背板上依次连续粘附有吸水垫、硝酸纤维膜、结合垫和样品垫，所述样品垫靠结合垫一端搭接在结合垫上，所述吸水垫上表面吸附有手控区封膜，所述样品垫上表面吸附有样品端封膜，所述硝酸纤维膜上包被有兔抗鼠的IgG质控线和DCL-BSA两条检测线，结合垫上包被有抗CLE 和EDP 药物单克隆抗体-胶体金标记物。

同时检测烯草酮CLE和氯酯磺草胺EDP残留的试纸条的制备方法，它包括以下步骤：

步骤一、将半抗原去环酯烯草酮DCL与牛血清白蛋白偶联合成偶联物DCL-BSA；

步骤二、将步骤一合成的所述偶联物DCL-BSA免疫原免疫小鼠，通过细胞融合筛选得到抗CLE 和EDP 药物单克隆细胞株，分别将得到的抗CLE 和EDP药物单克隆细胞株注射到小鼠腹腔，得到抗CLE 和EDP 药物单克隆抗体，该抗体与烯草酮CLE 和氯酯磺草胺EDP有较高的交叉反应；

步骤三、用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

步骤四、提取小鼠IgG免疫健康家兔，得到兔抗鼠IgG抗体；

步骤五、将步骤二制成的所述抗CLE 和EDP 药物单克隆抗体加入步骤三制备的胶体金中，得到抗CLE 和EDP 单克隆抗体-胶体金标记物；

步骤六、将步骤五制备的所述抗CLE 和EDP 单克隆抗体-胶体金标记物包被在所述结合垫上；

步骤七、将步骤一合成的所述偶联物DCL-BSA分别包被在所述硝酸纤维素膜中，得到检测线；

步骤八、将步骤四中制备的所述兔抗鼠IgG抗体包被在所述硝酸纤维素膜中，得到质控线；

步骤九、将所述手控区封膜、所述吸水垫、所述硝酸纤维素膜、所述结合垫、所述样品垫和所述样品端封膜依次粘贴在所述背板上，制得同时检测烯草酮CLE 和氯酯磺草胺EDP残留的试纸条。

胶体金免疫层析技术与目前普遍采用的标记免疫分析技术相比，具有简便快速，特异性强、敏感性高，肉眼判断，实验结果易保存，无需特殊仪器设备等优点，因此胶体金免疫层析技术在药物残留检测领域得到了广泛应用。