[发明专利]杂交瘤细胞BPA‑4C7及其产生的双酚A单克隆抗体有效

专利信息
申请号: 201510019495.7 申请日: 2015-01-15
公开(公告)号: CN104762266B 公开(公告)日: 2017-10-31
发明(设计)人: 时国庆;孙清;邓乾民 申请(专利权)人: 北京科技大学
主分类号: C12N5/20 分类号: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/74;G01N33/577
代理公司: 北京金智普华知识产权代理有限公司11401 代理人: 皋吉甫
地址: 100083*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 杂交瘤 细胞 bpa c7 及其 产生 单克隆抗体
【权利要求书】:

1.杂交瘤细胞株BPA-4C7,其特征在于:已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC NO.10201;其中所述的杂交瘤细胞是通过BPA与BSA形成的人工抗原免疫小鼠后获得的淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合筛选获得,其中所述的人工抗原的制备方法如下:

BPA通过活化得到BPA羧酸酯,水解得到BPA羧酸,再在EDC和NHS存在的条件下与载体蛋白发生偶联反应,得到相应的人工抗原;具体为:

1)BPA羧酸的合成

将1.14g BPA溶于30mL丙酮,加入276mg碳酸钾;将143μL 4-溴丁酸乙酯溶于1mL丙酮,然后将该溶液滴加到沸腾的BPA溶液中,得到化合物A;将18mg化合物A溶于2mL乙醇,然后将0.5ml的1M氢氧化钠溶液加入其中;反应液在油浴中加热回流1小时;压蒸馏得到产物的钠盐;用2ml水将粗品溶解,用2M盐酸调至pH=2,然后用2mL乙酸乙酯萃取4次,乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥,吹干得到BPA的羧酸,其为白色晶体12mg;

2)人工抗原的合成

取12mg干燥的BPAB溶于1.2ml的DMF中配制成10mg/ml溶液备用;将85mg的EDC和27mg的NHS溶于0.6ml的DMF中,取配置好的BPAB溶液滴加到EDC的溶液中,室温震荡24个小时得到活化的BPAB溶液;在3ml的棕色试剂瓶中加入0.282ml的硼酸-硼砂缓和0.718ml的BSA液, 然后将活化好的0.4mL BPAB溶液滴加到BSA溶液中,室温搅拌20个小时;反应完成后,用2L PBS透析3次,每次一天;最后将透析袋中的液体收集,-20℃保存;其中所述的硼酸-硼砂缓冲液浓度为0.2M, pH为7.4,BSA溶液为50mg/mL;

3)人工抗原的鉴定

通过紫外光谱扫描法及质谱鉴定表明制备得到了双酚A的完全抗原BPA-BSA。

2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株BPA-4C7分泌的抗双酚A单克隆抗体,其特征在于:它由所述的杂交瘤细胞株BPA-4C7所分泌产生。

3.权利要求2所述的抗双酚A单克隆抗体的应用,其特征在于在双酚A分析检测中的应用,对双酚A具有较好的亲和力和检测灵敏度,用于食品安全中双酚A免疫检测。

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