[发明专利]日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法和四倍体杂交鱼的应用

说明书

技术领域

本发明涉及鱼类杂交方法，具体涉及一种鲫鱼与团头鲂的亚科间远缘杂交方法。

背景技术

杂交技术是改良鱼类性状常用的方法，是通过杂交将两个或两个以上品种的部分优良性状整合的育种方法，它是最基础的鱼类育种方法之一，也是被广泛采用的育种手段。亲缘关系在种间或种间以上的杂交一般称为远缘杂交。远缘杂交作为一种重要的鱼类遗传育种和性状改良方法，它可以整合整套外源基因，从而改变杂交后代基因的表达调控，使得杂交后代可能在生长速度、抗逆性、抗病性以及肉质等方面表现出杂种优势。如红鲫与湘江野鲤的属间远缘杂交形成的杂交后代具有生长速度快、肉质鲜嫩、抗病力强、存活率高等优点；而红鲫与团头鲂的杂交后代中发现有三倍体(3n＝124)与四倍体(4n＝148)杂交后代。以往的日本白鲫与团头鲂的杂交虽然也有进行，但在其后代中仅仅发现了三倍体杂交后代个体，而未检测到四倍体。

如何利用和改进现有的生物学技术和方法，在现有鱼品种中挑选合适的亲本鱼进行远缘杂交，从而对其进行遗传改良以获得性状更为优良、品种更加丰富和对遗传研究更有意义的新型多倍体鱼，就成为本领域技术人员长期面临和需要解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种不仅杂交后代性状优良、而且能为品种选育奠定良好基础、为后续新型多倍体鱼的选育提供宝贵资源的日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法，以及该方法获得的四倍体杂交鱼的应用。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法，其特征在于：所述方法是以日本白鲫为母本，以团头鲂为父本，将性成熟的日本白鲫的卵子与团头鲂的精子进行人工干法受精，受精卵在20℃～21℃水温下孵化，鱼苗在池塘中饲养；再利用流式细胞DNA含量测定法、外周血细胞培养的染色体倍性检测方法和血涂片法对鱼苗进行DNA含量、染色体数目以及血细胞大小的检测，筛选后制备得到三倍体杂交鱼和四倍体杂交鱼。

上述本发明的技术方案中，日本白鲫(Carassius auratus cuvieri Temminck et Schlegel)隶属于鲤形目，鲤科，鲤亚科鲫属中的二倍体鱼(2n＝100)，日本白鲫适应性强，耐寒、耐高温、性成熟早、繁殖率高、养殖成本低，是一种成长快、经济效益高的优质鱼类；团头鲂(Megalobrama amblycephala Yih)隶属于鲤形目，鲤科，鲌亚科，鲂属中的二倍体鱼(2n＝48)，体高侧扁，尾柄高而短，体型优美，草食性，生长速度快，抗逆性强，肉质细嫩、腴美，脂肪丰富。本发明通选择日本白鲫为母本、团头鲂为父本进行远缘杂交，获得了具备多种杂交优势的新型三倍体、四倍体杂交鱼类。杂交后代整合了父、母本体形优美、生长速度快、抗逆性强、肉质细嫩、营养价值高等优良性状，具有良好的市场前景。并且，杂交后代中获得的四倍体后代，有望大规模应用于三倍体鱼的生产，在水产养殖中具有重要意义。

上述的日本白鲫与团头鲂亚科间远缘杂交的方法，优选的，所述方法具体包括以下步骤：

(1)亲鱼的选择和培育：在繁殖期前3～4个月，挑选性成熟特征明显、体征良好的雌性日本白鲫和雄性团头鲂分别作为远缘杂交的母本亲鱼和父本亲鱼进行专池培育(体征良好的亲鱼一般表现为体型好、体色鲜艳、体质健壮、无病无伤)，保持水质良好；在繁殖期前一个月左右以精饵饲养，每隔2～3天流水刺激一次，以促进亲鱼性腺发育成熟；

(2)人工催产：在当年的5月中旬至6月上旬，当水温稳定在20℃以上时，为亲鱼注射黄体素释放激素类似物(LRH-A)与绒毛膜促性腺激素(HCG)的混合催产剂进行催产，所述黄体素释放激素类似物的用量为10μg/kg，绒毛膜促性腺激素的用量为600IU/kg；先注射母本亲鱼，4～5h后再注射父本亲鱼，父本亲鱼的注射剂量减半；注射完毕后按1∶6～8的数量比将母、父本亲鱼放入同一产卵池中(水面面积为80m²左右)，然后视水情及时向池中冲水；在产卵前3～4h，注入一定水量后，停止注水，让鱼在静水中催产，直至其开始顺利产卵和产精；

(3)授精孵化：挑选产卵顺利的母本亲鱼，然后与产精量大的父本亲鱼进行人工干法授精，受精卵置于水温为19℃～20℃的培养皿中静水孵化；