[发明专利]一种金纳米棒生物复合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种_dAb-AuNR-Fc的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）AuNRs@SiO₂的制备：首先，根据经典的种子法制备十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）包被的金纳米棒（AuNR-CTAB）；

其次，制备AuNRs@SiO₂：将10 mL AuNR-CTAB于9000转/分钟离心10分钟，加入10 mL超纯水重悬，反复2次；

在搅拌条件下，向10 mL AuNR-CTAB水溶液中加入100 μL氢氧化钠（0.10 mol/L），然后加入60 μL正硅酸乙酯/3-氨基丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液，继续搅拌24小时后收集，即得到AuNRs@SiO₂，然后将其用超纯水洗涤并分散于5.0 mL磷酸缓冲溶液（PBS）中，待用；

（2）_dAb-AuNR-Fc的建立：取1.0 mL AuNRs@SiO₂溶液，在搅拌条件下，加入1.0 mL 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐/N-羟基琥珀酰亚胺混合溶液反应10分钟，然后依次加入10 μL检测抗体（_dAb）（4.0 mg/mL）、1.0 mL二茂铁甲酸（Fc）饱和水溶液，继续搅拌2小时即制得_dAb-AuNR-Fc；

将其用超纯水洗涤并分散于1.0 mL PBS中保存于4 °C冰箱。

2.根据权利要求1所述的一种_dAb-AuNR-Fc的制备方法，其特征在于正硅酸乙酯/3-氨基丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液体积比：1:1:5。

3.根据权利要求1所述的一种_dAb-AuNR-Fc的制备方法，其特征在于1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐与N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为4:1。

4.权利要求1所述的_dAb-AuNR-Fc生物复合物检测乳制品中大肠杆菌的方法，按照下述步骤进行：

（1）基于抗体的免疫传感器的制备：金电极修饰前需进行预处理，方法是：先依次用0.3 μm、0.05 μm的Al₂O₃粉末在金相砂纸上打磨抛光，再依次用乙醇、水超声清洗，最后置于0.50 mol/L硫酸溶液中在-0.3 ~ 1.5 V电位范围内进行循环伏安扫描，直至得到稳定的循环伏安图；

把预处理过的金电极浸入0.02 mol/L半胱氨酸的乙酸缓冲溶液（pH 5.0）中自组装6 h；

取出电极用水清洗后，置于0.40 mol/LEDC-0.10 mol/L NHS的溶液中反应1小时用于活化电极末端的羧基，然后用PBS清洗电极表面并用氮气吹干；

将10 μL捕获抗体溶液（1.0 mg/mL）滴涂在金电极表面并在37 °C下培养1 h后，用PBS清洗电极以除去未结合的抗体并晾干；

在电极表面滴加1.0%牛血清白蛋白磷酸缓冲溶液并培养30 min以封闭活性位点制备免疫传感器；

（2）电化学检测：将制备的免疫传感器清洗并吹干后，将其放入一定浓度的大肠杆菌溶液中，在35 oC下培养50 min；

用PBS清洗电极后，将10 μL _dAb-AuNR-Fc涂于电极表面并培养50 min构建“三明治”免疫分析模式；

然后，用水清洗电极并将其浸入5.0 mL含0.10 mol/L KClO₄的PBS中并采用示差脉冲伏安法测定固定在电极表面的Fc，扫描电位从0 ~ 0.70 V；

基于Fc产生的电流信号与大肠杆菌浓度之间的关系实现了对大肠杆菌的检测。

5.根据权利要求4所述的_dAb-AuNR-Fc生物复合物检测乳制品中大肠杆菌的方法，其特征在于金电极Ф=3 mm。