[发明专利]一种副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物模型构建领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法。

背景技术

HPS(Haemophilus parasuis，副猪嗜血杆菌)是一种定居在猪上呼吸道部位的革兰氏阴性短小杆菌，HPS的毒力菌株侵入猪体后会使猪产生严重的系统性炎症疾病，临床表现以格拉泽氏病(Disease)，即血纤维蛋白性心包炎、多发性关节炎和脑膜炎；有些感染猪只还表现出急性肺炎和急性败血症。

从上个世纪末至今，HPS感染给世界各国的养猪业造成了严重的损失，HPS已成为猪场最主要的细菌性病原体之一，在我国呈全国性病发趋势。

现阶段没有预防HPS感染的有效措施。通常，在猪感染HPS后大量使用抗生素进行治疗，但一方面抗生素使用会造成养殖成本上升；另一方面大量抗生素的使用会导致排泄物和肉制品中存有抗生素残留，排泄物排入环境中容易造成环境污染，人体摄入含有抗生素的肉制品后，抗生素会在人体内聚集，导致人体抵抗力降低。因此，需要降低猪感染HPS后抗生素的使用量。

目前降低抗生素使用量的途径包括使用疫苗和培育抗病猪种，由于抗病育种可以从根本上解决病原体感染，因此，抗病育种成为未来猪育种产业发展的新方向。研究显示：常规的猪群中，不同的猪个体感染HPS后的表现存在差异，该差异与猪个体的遗传基因有关，该现象为通过遗传改良培育出抗性品系和/或抗性品种提供了充分的依据。

目前，本领域技术人员通过建立感染模型来筛选相关抗病基因，建立可靠的活体感染模型是培育出抗性品系和/或抗性品种的关键。建立感染模型(以下简称建模)具体是指：通过实施攻毒试验，收集攻毒后(含对照)的猪只在临床病征、生长发育、体温变化、血液参数和免疫指标表型数据用以评判建模效果，最终在实验室(或实验动物中心等实验性场地)复制出病原体感染猪只的相关生物学现象。

根据实验猪只的区别，可以将现有的感染模型分为普通级、CD级(Colostrum-Deprived，禁食母猪初乳)、CDCD级(Caesarean-Derived and Colostrum-Deprived，剖腹产、禁食母猪初乳)和SPF级(Specific pathogen free，无特定病原体)。

普通级感染模型建立时，直接通过母体初乳对仔猪进行喂食，并对仔猪进行多次疫苗免疫，由于母体初乳中含有大量的抗体，可能会导致仔猪机体产生免疫，同时，进行疫苗免疫后也会产生抗体，产生抗体后的仔猪经HPS攻毒后可能会自行康复，难以复制HPS感染；HPS是一种寄居在猪上呼吸道部位的常见菌和机会性致病菌，母猪通常携带有HPS，因此会直接感染猪仔，影响建模效果。总之，普通级感染模型建立过程中存在较多影响因素，尤其是模型不稳定、结果不准确。

CDCD级感染模型建立时，仔猪是通过剖腹产得到的，对母猪实施剖腹产时，需要配备专业能力较强的外科手术医生和严格的无菌手术室，成本较高，难以推广。

SPF级感染模型建立时，需要使用HPS阴性猪，现在，HPS阴性猪群已很难找到，建模成本较高，操作难度较大，可靠性较低，难以推广。

CD级感染模型建立时，仔猪经母猪自然分娩后立即与猪舍隔离，一方面隔绝了CD仔猪出生早期HPS在上呼吸道的定植，另一方面由于禁食初乳最大程度上避免了母体抗体的不利影响；建模期间不需要苛刻的无菌环境，饲养条件也相对宽松，操作较为简单。所以CD仔猪是最适合作为HPS活体感染建模的实验动物，综合比较来看有望使得格拉泽氏病的复制更稳定、更现实、更可靠。

目前，Blanco等人所在的课题组(西班牙CISA)以及与之合作的PIC种猪公司和美国Minnesota大学相关课题组利用CD仔猪进行HPS感染建模。

现有的CD级感染模型建立时存在以下缺陷：

(1)CD仔猪喂养时，先使用牛初乳喂食3天，通常来讲，牛初乳的获得并不方便且需要做灭菌处理，不仅提高了实验成本而且可能会因含有牛肠炎病毒增加CD仔猪腹泻风险，CD仔猪的死亡率较高。

(2)已有模型对21日龄的CD仔猪进行攻毒，由于21日龄的CD仔猪体内器官发育尚不完善，相关实验结果可能难以全面反映猪只感染HPS后的症状，准确度较低；同时，使用与生产上断奶日龄(15～21日龄)相接近的CD仔猪进行实验，不太符合动物福利的相关举措。

(3)现有的CD仔猪至感染前存活率仅为50％～78.9％，存活率较低，实验成本较高。

发明内容