[发明专利]一种副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法

权利要求书

1.一种副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、将自然分娩得到的若干禁食母猪初乳CD仔猪进行隔离，饲养至18～25日龄，将未死亡的CD仔猪随机均分为两组：感染组A和对照组B；待感染组A和对照组B的所有CD仔猪生长至30～40日龄时，采集感染组A和对照组B中所有CD仔猪的鼻拭子和非抗凝外周血；判定鼻拭子中不存在副猪嗜血杆菌HPS病原、且非抗凝外周血中不含猪胸膜肺炎放线杆菌APP病原或APP血清抗体，转入步骤二；

步骤二、待感染组A和对照组B的所有CD仔猪生长至40～70日龄时，向感染组A中所有CD仔猪的气管内接种剂量为10⁷CFU～10⁹CFU、分散于培养基中的HPS细菌，得到攻毒组A′；接种HPS细菌的同时，向对照组B中所有CD仔猪气管内注射与HPS剂量相同的培养基，得到空白组B′，转入步骤三；

步骤三、接种HPS细菌1～20天后，分别提取攻毒组A′、空白组B′的肺脏组织的总DNA，当攻毒组A′的肺脏组织的总DNA中存在HPS病原、且空白组B′的肺脏组织的总DNA中不存在HPS病原时，建模成功；当攻毒组A′的肺脏组织的总DNA中不存在HPS病原，或空白组B′的肺脏组织的总DNA中存在HPS病原时，重新执行步骤一～步骤三。

2.如权利要求1所述的副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法，其特征在于，步骤一中所述将自然分娩得到的若干CD仔猪进行隔离，养殖至18～25日龄包括以下步骤：母猪自然分娩时人工助产，防止仔猪分娩后接触母猪、地面、栏舍及其他猪场物品，立即放入温度为33～35℃的无菌保温箱中，待CD仔猪体表干燥、保温箱内站立稳定或行走自如后，使用奶瓶饲喂温度为37℃的温开水约40ml，出生后3～5h内，将CD仔猪转移至实验动物中心负压条件下，温度为28～35℃的仔猪保育栏中；

CD仔猪的1～12日龄均喂食人工乳，其中：1～2日龄每日喂食次数为5次，3～4日龄每日喂食4次，5～14日龄每日喂食3次；每次的喂食量根据日龄的增长逐渐增加；CD仔猪自13日龄起，采用人工乳并辅助颗粒饲料喂食，其中：15～21日龄每日喂食3次，22日龄后自由采食颗粒饲料和饮水，养殖至18～25日龄时，CD仔猪的存活率为80％～85％。

3.如权利要求2所述的副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法，其特征在于：自CD仔猪7日龄起开始训练采食颗粒料，CD仔猪13日龄后强制性在人工乳中添加CD仔猪颗粒料，首次添加量为：每升流食中含人工乳粉112g、颗粒料28g，之后按照颗粒料每日5～10％的比例递加，对应人工乳粉以5～10％的比例减少。

4.如权利要求1所述的副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法，其特征在于：步骤一中将自然分娩得到的若干禁食母猪初乳CD仔猪进行隔离，饲养至18～25日龄，包括以下步骤：将CD仔猪饲养至3日龄后，判定CD仔猪拉稀，根据CD仔猪的体重，自发现日起，连续3天，向对应CD仔猪早晚分别注射50μl/kg的土霉素注射液和头孢噻呋钠注射液，并每天灌食糖盐水，每升糖盐水中含20g葡萄糖、3.5g氯化钠和2.5g碳酸氢钠。

5.如权利要求1所述的副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法，其特征在于，步骤一中所述采集感染组A和对照组B中所有CD仔猪的鼻拭子和非抗凝外周血之后，还包括以下步骤：判定鼻拭子中存在HPS病原、且非抗凝外周血中含有APP病原或者非抗凝外周血含有APP血清抗体，将对应的CD仔猪移除，转到步骤二。

6.如权利要求1所述的副猪嗜血杆菌感染仔猪模型的构建方法，其特征在于，步骤二和步骤三之间还包括以下步骤：观察攻毒组A′、空白组B′中所有CD仔猪的行为举止、呼吸、跛行、关节肿胀、神经症状、咳嗽和进食情况；

采集所有攻毒组A′和空白组B′中CD仔猪的外周血，检测所有外周血的血液参数；攻毒1～20天，后将攻毒组A′、空白组B′中所有CD仔猪麻醉并放血，采集每头CD仔猪的颈部淋巴结、腹股沟淋巴结、腹膜、肠系膜淋巴结、肝、脾、肾、肺脏、心、脑膜和大脑组织；并对腹膜、脾脏、心脏、肺脏、脑膜、大脑组织进行切片并染色观察。