[发明专利]用于卵巢卵泡生长和成熟的方法

权利要求书

1.促进个体中哺乳动物卵母细胞的生长和成熟的方法，所述方法包括：

将多个哺乳动物多能细胞工程改造以包含颗粒细胞特异性报告分子，其中所述颗粒细胞特异性报告分子的表达指示作为颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞的细胞；

在适合于所述哺乳动物多能细胞分化为颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞的条件下，体外培养所述多个哺乳动物多能细胞；

基于所述颗粒细胞特异性报告分子的表达，分离颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群；以及

使所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群与哺乳动物卵巢组织接触，其中所述哺乳动物卵巢组织包含卵泡和/或未成熟卵母细胞，其中所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞促进所述卵泡和/或所述未成熟卵母细胞的生长和成熟。

2.权利要求1的方法，其中所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞的群和所述哺乳动物卵巢组织是自体的。

3.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物卵巢组织是人的。

4.权利要求1的方法，其中所述颗粒细胞特异性报告分子包括在卵巢颗粒细胞特异性基因控制下的荧光报告分子。

5.权利要求4的方法，其中所述卵巢颗粒细胞特异性基因选自：叉头框L2 (Foxl2)、无翼型MMTV整合位点家族成员4 (WNT4)、Nr5a1、Dax-1、ATP-结合盒亚家族9 (Abca9)、乙酰辅酶A酰基转移酶2 (线粒体3-氧代酰基-辅酶A硫解酶; Acaa2)、肌动蛋白α2（平滑肌、主动脉）(Acta2)、具有1型凝血酶基序的解整联蛋白样和金属肽酶（reprolysin样）17 (Adamts17)、ADAMTS-样2 (Adamtsl2)、AF4/FMR2家族成员1 (Aff1)、表达序列AI314831 (AI314831)、醛酮还原酶家族1成员C14 (Akr1c14)、醛酮还原酶家族1、Notch2以及成员C样(Akr1cl)。

6.权利要求4的方法，其中所述荧光报告分子选自：海葵种(Discosoma sp.)红（DsRed）、绿色荧光蛋白(GFP)、黄色荧光蛋白(YFP)和橙色荧光蛋白(OFP)。

7.权利要求1的方法，其中将所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群与哺乳动物卵巢组织接触先体外后体内进行。

8.权利要求1的方法，其中将所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群与哺乳动物卵巢组织接触体内进行。

9.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物多能细胞选自：胚胎干细胞（ESC）、诱导多能干细胞（iPSC）或其他重编程体细胞、骨髓来源的细胞和外周血来源的细胞。

10.提高有需要的个体中一种或多种甾体激素的水平的方法，所述方法包括：

将多个哺乳动物多能细胞工程改造以包含颗粒细胞特异性报告分子，其中所述颗粒细胞特异性报告分子的表达指示作为颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞的细胞；

在适合于所述哺乳动物多能细胞分化为颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞的条件下，体外培养所述多个哺乳动物多能细胞；

基于所述颗粒细胞特异性报告分子的表达，分离颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群；以及

向所述个体施用有效量的所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群，其中所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞分泌一种或多种甾体激素，且其中施用所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群之后，所述个体相比于施用所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞经富集的群之前的个体展示出一种或多种甾体激素的水平升高。

11.权利要求10的方法，其还包括刺激所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞以分泌甾体激素。

12.权利要求10-11中任一项的方法，其中所述甾体激素选自：雌二醇、雌三醇、雌酮、孕烯醇酮和黄体酮。

13.权利要求11的方法，其中通过卵泡刺激激素（FSH）、8-溴腺苷3′,5′-环单磷酸 (8-br-cAMP)和黄体化激素（LH）刺激所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞以分泌甾体激素。

14.权利要求10的方法，其中所述颗粒细胞或颗粒细胞前体细胞的群对于所述个体是自体的。

15.权利要求10的方法，其中所述个体是人。