[发明专利]制备层析材料的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本案引用2013年11月17日提交的美国专利临时申请案， 申请号为61/905,238，发明名称为“制备新的色谱层析材料的 方法及用於高選擇性色谱层析法的新色谱层析材料”；以及2013 年11月17日提交的美国专利临时申请案，申请号为61/905,239， 发明名称为“制备混合型树脂的方法及用于高选择性色谱层析 法的混合型树脂”，通过引用及主张上述申请案的优先权，将上 述申请案的全部内容并入至本文中。

技术领域

本发明涉及一种制备新的树脂用于高选择性色谱层析的方 法。

背景技术

以血浆作为为基础的产品在全球的需求量不断增加，因此寻 求有效和经济的方法用于生物技术纯化产物。包括在上述方法的 是多种蛋白质、酶、激素和其它来自于各种生理体液、自然资源 和培养介质的生物活性化合物的纯化。有关于色谱层析领域的分 离和纯化技术已得到相当多的关注。

目前对于现有的色谱层析材料中有效地且重要的应用于纯 化的现有知识并不充分。纯化产品是用于治疗药物、化妆品和食 品。例如，现有的色谱层析材料应用的缺点是：需要有预处理操 作的多步骤纯化架构、在纯化过程中的材料损失较大，且所得产 物收率低，产品成本高。

另一个问题涉及以原始人体血浆为起始分离和纯化免疫球 蛋白(IgG)。目前的IgG纯化技术使用的是科恩步骤的Ⅱ+Ⅲ分 馏物。然而，在上述纯化的阶段中，至少有30％的抗体是在许多 制造步骤中失去。因此，商业收益率上，仅能得到低于50％的原 始IgG抗体。

发明内容

本发明的实施例提供一种吸附剂材料，包括多个交联的单乙 烯基单体，定义一基质。疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基 单体的一体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲成为 从约5到约9的pH范围，以及多個颗粒，粒径介于约10微米至 约300微米之间。所述吸附剂用于层析管柱内以提升由血浆中分 离时的免疫球蛋白G的结合力，因而分离出的免疫球蛋白G接着 从吸附剂中被提取出来。所述吸附剂亦用于层析管柱内以提升由 基因转殖乳类中分离时的免疫球蛋白G单株抗体的结合力，因而 分离出的免疫球蛋白G单株抗体接着从吸附剂中被提取出来。

本发明的实施例是以新的高选择性色谱层析材料为基础。

本发明的实施例包括色谱层析材料及其应用。所述材料中为 双功能性混合模式色谱层析材料，包括弱阳离子交换官能团和疏 水性官能团、新型单官能阴离子交换树脂及色谱层析疏水相互作 用的新材料。所述色谱层析材料被用以改善蛋白质、酶、糖蛋白、 多糖，特别是各种原料来源的色谱纯化过程中。

本发明的实施例用以提升免疫球蛋白G的从人体原始(raw) 血浆中分离与纯化效率，以用于治疗目的。

本发明的实施例包括从人体原始血浆中纯化免疫球蛋白G 的方法。所述方法包括从人体原始血浆中通过本发明的色谱层析 结构以层析纯化得到免疫球蛋白G。

本发明的部分实施例包括色谱层析结构以及其制备方法。所 述色谱层析结构结合材料特性，包括离子交换、疏水性和所需孔 径的原理。这些色谱层析材料提供本发明用于制造抗体的色谱层 析方法的优点。其优点包括：避免前处理、取代离心步骤(或微 孔过滤)、从原料来源高度选择性吸附示范、充分吸附回收、高 流体力学特性、结构体积稳定性流速为600毫升/小时。

本发明材料的结构可应用于低压液相层析(LPLC)，可承受至 少3巴下的压力。本发明所述双功能性混合模式材料或介质可以 被整合为从不同的原始来源第一步获得的抗体(和许多其他蛋白 质)。

相对于其他现有的树脂，本发明所述混合模式(如吸收剂材 料或介质)提供约两倍的抗体结合能力。在免疫球蛋白G所需吸 附条件下，PH值范围为6至7，提供使用混合模式得到高抗体纯 度。本发明为使得一个新的疏水交互作用层析(HIC)具备所需 的孔径尺寸，以用于研磨(IgG抗体完成纯化)。使用本发明实 施例结构纯化IgG的方法由2至3个步骤组成。

本发明省去了离心和淡化的需要，因为离子交换容量高，疏 水/亲水平衡且孔隙平均，例如，大的孔径。本发明的吸附剂材 料包括必要活性组成以分离IgG和IgG单株抗体。