[发明专利]包含使用修饰的单糖化合物的用于特异性标记活菌的方法

权利要求书

1.一种修饰的单糖化合物在制备用于在包含细菌的样品中特异性标记活的嗜肺军团菌Legionella pneumophila的试剂的用途，其中所述在包含细菌的样品中特异性标记活的嗜肺军团菌包括步骤：

a)将所述样品的所述细菌与至少一种修饰的单糖化合物孵育，所述单糖化合物包含能够与第二反应基团化学性反应的第一反应化学基团，以使带有所述第一反应化学基团的单糖残基被合并入该细菌的外膜的多糖中，和

b)将所述合并入细菌外膜中的修饰的单糖残基与包含所述第二反应基团的标记分子接触，以产生被合并入活菌的所述外膜中的所述单糖残基的所述第一反应化学基团与所述标记分子的所述第二反应基团的化学反应，导致共价连接，

其特征在于，所述修饰的单糖化合物为所述细菌的所述外膜的多糖的内源性酮糖酸残基的修饰的内源性前体，所述修饰的单糖化合物具有下式(Ia-1)的化合物或其盐：

其中：

-(Ia-1)为下式(Ic-1)和(Ic-2)的内源性单糖化合物的前体；

·(Ic-1)为

可见于嗜肺军团菌；

·(Ic-2)为

可见于嗜肺军团菌的LPS中。

2.根据权利要求1所述的用途，其中带有所述第一反应化学基团的单糖残基被合并入该细菌的外膜的LPS中。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述在包含细菌的样品中特异性标记活的嗜肺军团菌包括进一步的步骤：

c)检测活的嗜肺军团菌以检测所述细菌是否包含结合于它们的外膜的聚糖上的所述标记分子，和/或将带有所述标记分子的所述活菌固定在固体基质上，其中所述标记分子为包含可检测物质或能够与可检测物质反应或结合的分子，或者所述标记分子为带有所述第二反应基团的第一分子，所述第一分子能够与第二分子和/或固体基质反应或结合。

4.根据权利要求3所述的用途，其中所述第二分子包含可检测物质和/或所述第二分子结合于或能够结合于所述固体基质。

5.根据权利要求3所述的用途，其中修饰的单糖化合物用于在包含细菌的样品中特异性检测活的嗜肺军团菌，其中所述标记分子为包含可检测物质的可检测分子，所述在包含细菌的样品中特异性标记活的嗜肺军团菌包括检测活的嗜肺军团菌以检测所述细菌是否包含结合于它们的外膜的聚糖上的所述可检测分子的步骤c)。

6.根据权利要求3所述的用途，其中所述标记分子为带有所述第二反应基团的第一配体或第一结合蛋白，并且在步骤c)中偶联至所述第一配体或第一结合蛋白的所述活的嗜肺军团菌，通过将所述第一配体或第一结合蛋白与第二配体或第二结合蛋白接触被检测和/或固定，所述第二配体或第二结合蛋白与所述第一配体或第一结合蛋白特异性反应或结合。

7.根据权利要求3所述的用途，其中所述标记分子为第一配体，所述第一配体带有所述第二反应基团，并且在步骤c)中偶联至所述第一配体的所述活菌通过所述细菌与特异于所述第一配体的抗体的反应被检测，所述抗体带有可检测物质。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述第一配体为生物素。

9.根据权利要求7所述的用途，其中所述可检测物质为发冷光分子或酶。

10.根据权利要求7所述的用途，其中所述可检测物质为荧光染料。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的用途，其中所述第一反应化学基团选自叠氮基或带有叠氮基的基团和炔基或带有炔基的基团，并且所述第二反应基团选自炔基和叠氮基或分别带有炔基和叠氮基的基团，通过进行叠氮炔烃环加成反应进行叠氮基反应基团与炔烃反应基团的反应。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述第一反应化学基团为叠氮基。