[发明专利]表达构建体和用于表达真核细胞中的多肽的方法

权利要求书

1.一种表达构建体，其在5'至3'方向上包含：

启动子；

任选的第一剪接供体位点；

第一侧翼内含子；

第一剪接受体位点；

编码第一多肽的第一外显子；

任选的第二剪接供体位点；

第二侧翼内含子；

第二剪接受体位点；和

编码第二多肽的第二外显子，

其中在进入宿主细胞时，第一外显子的转录导致第一多肽的表达和/或第 二外显子的转录导致第二多肽的表达。

2.根据权利要求1所述的表达构建体，其中所述第一侧翼内含子和所述第 二侧翼内含子选自由鸡肌钙蛋白(cTNT)内含子4、cTNT内含子5和人 EF1alpha基因的第一内含子组成的组。

3.根据权利要求1或2所述的表达构建体，其中所述第一侧翼内含子和所 述第二侧翼内含子具有对于至少50个核苷酸的至少80％的核酸序列同源性。

4.根据权利要求1或2所述的表达构建体，其中所述第一侧翼内含子和所 述第二侧翼内含子具有对于至少50个核苷酸的至少95％的核酸序列同源性。

5.根据权利要求1或2所述的表达构建体，其中所述第一侧翼内含子和所 述第二侧翼内含子具有对于至少450个核苷酸的至少95％的核酸序列同源 性。

6.根据权利要求1，2或3的任一项所述的表达构建体，还包括至少一个多 聚嘧啶(聚(Y))区。

7.根据权利要求6所述的表达构建体，其中聚(Y)区是第一外显子的上游。

8.根据权利要求6所述的表达构建体，其中聚(Y)区是第一外显子的下游。

9.根据权利要求6，7或8中的任一项所述的表达构建体，其中所述聚(Y) 区包括少于30个的嘧啶碱基。

10.根据权利要求6，7或8所述的表达构建体，其中所述聚(Y)区包括10 个或少于10个的嘧啶碱基。

11.根据前述权利要求中的任一项所述的表达构建体，其中所述表达构建体 缺少第二剪接供体位点。

12.根据前述权利要求中的任一项所述的表达构建体，其中所述表达构建体 还包括位于所述启动子下游的第三剪接供体位点、内含子和第三剪接受体位 点。

13.根据权利要求12所述的表达构建体，其中所述剪接供体位点，内含子 和剪接受体位点是组成型的。

14.根据权利要求12所述的表达构建体，其中所述第三剪接供体位点之前 是5’UTR和/或所述第三剪接受体位点之后是5’UTR。

15.根据前述权利要求中的任一项所述的表达构建体，其中所述侧翼内含子 序列选自由SEQIDNos:129～175组成的组。

16.根据前述权利要求中的任一项所述的表达构建体，其中所述第一多肽是 抗体重链或其片段且所述第二多肽是抗体轻链或其片段，或者其中所述第一多 肽是抗体轻链或其片段且所述第二多肽是抗体重链或其片段。

17.根据前述权利要求中的任一项所述的表达构建体，其中所述第一多肽是 抗体重链且所述第二多肽是Fc-scFv，或其中所述第一多肽是Fc-scFv且所述第 二多肽是抗体重链。

18.编码根据前述权利要求的任一项所述的表达盒的多核苷酸。

19.包含权利要求18所述的一个或多个多核苷酸的克隆或表达载体。

20.包含权利要求19所述的一个或多个克隆或表达载体的宿主细胞。

21.根据权利要求20所述宿主细胞，其包括表达载体，所述表达载体包括 编码权利要求17的表达构建体的多核苷酸，所述表达构建体包括编码抗体轻链 或重链的表达的多核苷酸。