[发明专利]用于组织产物的酶处理的方法

说明书

本申请是在35U.S.C.§120下于2013年9月5日提交并且通过引 用以其全文结合在此的美国申请号14/019,274的一个部分继续申请。

本披露涉及组织基质，并且更具体地，涉及通过用蛋白水解酶处 理基质来控制组织基质的机械和/或生物学特性的方法。

不同组织衍生的产物被用于再生、修复、或另外治疗患病的或受 损的组织和器官。此类产品可以包括完整组织移植物和/或无细胞的或重建 的无细胞组织(例如来自皮肤、肠、或其他组织的无细胞组织基质，用或 不用细胞接种)。此类产品一般具有由组织来源(即组织型及它所来源的 动物)和用于生产该组织产物的加工参数所决定的机械特性。因为组织产 物通常用于外科应用和/或组织置换或增强，所以组织产物的机械特性是重 要的。例如，外科医生通常优选感觉像天然组织和/或在手术程序期间容易 操作的组织。然而，一些组织产品不令人希望地是僵硬的和/或具有不自然 的感觉。因此，提供了用于处理组织产物以产生更加令人希望的机械特性 的方法。

此外，当被植入体内时，衍生自外源性材料(例如，来自其他动 物或者患者的组织、连同任何类型的经处理的组织)的组织产物可以在受 者内引发一种炎症或免疫应答。在一些情况下，过度免疫应答可能是有害 的，引起该植入体形成不希望的瘢痕组织，或预防组织于植入部位的适合 的再生。因此，提供了用于处理组织产物以减少或控制组织产物在植入时 的免疫应答的方法。

概述

根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法 可以包括选择一种含胶原的组织基质，并且使该组织基质与一种蛋白水解 酶在足以使该组织基质内产生所希望的柔软性水平的条件下相接触。

在另一个实施例中，提供了用于处理组织基质的方法。该方法可 以包括选择一种含胶原的无细胞组织基质，并且使该组织基质与一种蛋白 水解酶在足以使该组织基质内产生所希望的柔软性水平并且增加该组织 基质的多孔性的条件下相接触。

在一些实施例中，提供了一种无细胞组织基质。该基质可以通过 一种工艺来制备，该工艺包括选择一种无细胞组织基质，并且使该组织基 质与一种蛋白水解酶在足以使该组织基质内产生所希望的柔软性水平的 条件下相接触。

根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法 可以包括选择至少一种含有胶原的组织基质；使该至少一种含有胶原的组 织基质与一种蛋白水解酶相接触；并且进行一种测定来确定使该至少一种 含有胶原的组织基质与至少一种蛋白水解酶相接触是否已经改变了该至 少一种含有胶原的组织基质，从而当该组织基质植入人体中时减少人对该 组织基质的免疫应答。

根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法 可以包括选择一种真皮组织基质；并且使该真皮组织基质与碱性蛋白酶在 包括一个孵育时间的条件下于具有碱性蛋白酶活性的一种溶液中相接触， 这些条件经选择以产生如通过悬垂性试验测量的该组织基质柔软性的所 希望的增加而不产生显著的胶原降解。

根据某些实施例，提供了一种用于处理组织基质的方法。该方法 可以包括选择一种真皮组织基质；并且使该真皮组织基质与碱性蛋白酶相 接触；并且用辐射处理该组织基质，其中该碱性蛋白酶是在经选择以在用 辐射处理后产生所希望的组织基质柔软性的条件下提供的。

附图说明

图1A-1D显示使用实例1所描述的方法用酶处理之后的无细胞组 织基质，以及未处理的对照。

图2是根据实例1的方法，处理过的和对照样品拉伸强度测试数 据的盒形图。

图3是根据实例1的方法，处理过的和对照样品缝合强度测试数 据的盒形图。

图4是根据实例1的方法，处理过的和对照样品撕裂强度测试数 据的盒形图。

图5是根据实例1的方法，处理过的和对照样品弹性测试数据的 盒形图。

图6是根据实例1的方法，处理过的和对照样品抗蠕变性测试数 据的盒形图。

图7展示根据实例2.2，未处理的组织及使用菠萝蛋白酶和碱性蛋 白酶处理的组织的DSC热谱图。

图8A-8B展示使用实例2.4中描述的单核细胞活化测定，活化标 记CD14(A)和CD163(B)在与不同组织共培养的单核细胞中的表达模 式。