[发明专利]用于生物分析的装置和方法

说明书

技术领域

本发明涉及在生物分析过程中检测和/或量化液体样品中的分析物的领域。本发明的目的特别是用于进行夹心型免疫测定以便检测和/或量化样品中的至少一种分析物的装置和方法。具体地说，本发明能够实现了在所述夹心型免疫测定的框架内所用的分析物结合伴侣的生物对照(功能/操作特性对照)，以便防止在所用的所有或一些结合伴侣有缺陷时获得假阴性结果。

背景技术

夹心型免疫测定广泛应用于生物分析以检测和/或量化给定的分析物。这些夹心型免疫测定(或者简称为“夹心免疫测定”)使用第一结合伴侣(被称为“捕获结合伴侣”)和第二结合伴侣(被称为“检测结合伴侣”)，第一结合伴侣通常被固定在固相上以特异性结合所寻找的分析物，第二结合伴侣被标记且被设计成特异性结合所寻找的分析物，从而显示捕获结合伴侣和分析物之间的结合，并因此显示该分析物的存在。换句话说，发现所寻找的分析物自身被“夹”在所述第一结合伴侣和第二结合伴侣之间，该第一(“捕获”)结合伴侣一般相对于所寻找的分析物是过量存在的。捕获结合伴侣可以例如被固定在固相支持体上(通过共价键合、吸附或任何其他适当的方法)，并且量通常必须使得在捕获结合伴侣上存在的结合位点的数目大于在标准溶液或未知溶液中存在的抗原分子的数目。标记的检测结合伴侣可以例如同时或者在最初孵育和洗涤后被加入，并结合于之前固定在捕获结合伴侣上的抗原。

简单的洗涤操作用于使捕获结合伴侣-分析物-(标记的)检测结合伴侣复合物与过量存在的游离的标记检测结合伴侣分离。

对于能够结合已参加与捕获结合伴侣反应的分析物的标记检测结合伴侣而言，使两种结合伴侣识别分析物的不同区域是必要的。

检测结合伴侣的标记可以例如借助于放射性同位素或者通过酶促方法。无论如何，在各种标记情况中，对应于捕获结合伴侣–分析物–标记的检测结合伴侣复合物的信号是表示存在于测试样品中的(一种或多种)分析物的量的信号。

通常，在夹心型免疫测定中，捕获结合伴侣和检测结合伴侣是识别不同于所寻找的分析物的表位的抗体，在此实施方式中所寻找的分析物由抗原组成。被用作捕获结合伴侣(“第一结合伴侣”)和检测结合伴侣(“第二结合伴侣”)的抗体可以是例如多价多克隆抗体或各种特异性单克隆抗体。

使用对分析物的两个不同位点(例如抗原的两个不同表位)具有识别特异性的两个结合伴侣(例如抗体，如单克隆抗体)使得该方法具有非常良好的灵敏度。因此，为了获得对应于与关注的分析物混淆的检测分子的“假阳性”，该分子必须具有与寻找的分析物相同的所述两个表位。通过正确选择所述表位，从而能够极其显著地减少其它高同源性分子的干扰。

夹心型免疫测定，由于其具有高灵敏度，可以成为各种类型试验的基础。举例来说，在EIA(“酶免疫测定”)框架内可以提及的有夹心ELISA试验(“酶联免疫吸附测定”)。广义地说，该试验如下进行：

a.用一定量的所谓的“捕获”抗体覆盖表面(例如板，如“96孔”板)；

b.加入能够含有所寻找抗原的样品，以使存在的任何抗原与捕获抗原结合；

c.洗涤板以消除除分析物以外的所有未固定的分子；

d.加入所谓的“检测”抗体(直接地或结合有酶地)，其与抗原结合，从而形成捕获抗体-抗原-检测抗体复合物；

e.冲洗板以使此复合物与过量存在的游离的标记检测抗体分离；

f.适用时，加入显色酶底物或荧光酶底物(这被称为“ELFA”测定)；所述底物被酶转化成可检测形式(带有颜色或荧光)。

这种“ELISA夹心”试验的结果可以通过肉眼或在专门设计成直接容纳板(例如“96孔”板)的分光光度计中进行分析。