[发明专利]制备高纯度的肉毒杆菌毒素神经毒性组分的方法及其应用

权利要求书

1.一种制备高纯度的肉毒杆菌毒素神经毒性组分的方法，所述方法包含以下步骤：

(a)在允许产生肉毒杆菌毒素的条件下培养肉毒杆菌，和

(b)从所述肉毒杆菌毒素分离所述神经毒性组分，

其中培养步骤(a)和分离步骤(b)在压力梯度装置中进行，所述装置包含第一隔离器单元，其含有培养肉毒杆菌的发酵罐，和任选的第二或另一个隔离器单元，所述第一和第二或另一个隔离器单元位于生产室，所述生产室通过气锁与环境通连，其中所述第一和第二或另一个隔离器单元中的压力低于生产室中的压力，所述生产室中的压力低于环境压力，并且所述气锁中的压力高于环境压力，并且其中所述压力梯度装置还包含安全工作台，其是II级BSC(生物安全柜)，配备有允许将材料无菌传送进出所述BSC的传送系统，所述安全工作台也位于所述生产室中，并且

其中培养温度保持在33.5℃±0.2℃的温度下。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)中培养期间的细胞密度通过利用福尔马肼作为一级浊度标准品的浊度测量来监测。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中肉毒杆菌的培养持续到细胞密度从培养24小时后达到的1.3±0.3FTU的细胞密度降低到小于0.8FTU为止。

4.根据权利要求1所述的方法，其中用于步骤(a)的肉毒杆菌培养物通过如下所述得到：(i)提供细胞密度为530至850FTU的肉毒杆菌初始培养物和(ii)向发酵培养基添加预定量的所述初始培养物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述初始培养物以5.0％至10.0％v/v的量添加到所述发酵培养基中。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述II级BSC的传送系统包含彼此可拆卸连接的第一传送单元和第二传送单元，所述第一传送单元是安装在BSC表面上或固定在所述BSC的壁上的可密封部件，而所述第二传送单元是可密封的容器。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述肉毒杆菌是A型肉毒杆菌，包括Hall菌株。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述Hall菌株是Hall菌株ATCC 3502。