[发明专利]软骨损伤治疗剂及其制造方法

说明书

本发明涉及的软骨损伤治疗剂的制造方法包含以下工序:在含有FGF、PDGF、TGF‑β、HGF、EGF、至少一种磷脂和至少一种脂肪酸的无血清培养基A中，使间充质干细胞增殖的增殖工序；将上述增殖工序后的间充质干细胞、等张保存剂和细胞保护剂混合的混合工序。通过该制造方法提供一种很好地使软骨组织再生的软骨损伤治疗剂。

技术领域

本发明涉及软骨损伤治疗剂及其制造方法，进一步涉及该制造方法所使用的培养基用添加剂、培养用培养基和试剂盒、以及使用它们的培养方法。

背景技术

在膝等关节部位，位于滑膜内侧的活动性关节中存在的软骨组织由II型胶原蛋白、蛋白聚糖和水等构成，将其定义为关节软骨(透明软骨)。另一方面，作为关节部位以外存在的软骨组织的构成成分，与II型胶原蛋白相比，多数为I型胶原蛋白。

关节软骨修复能力低，一旦损伤时基本不可能自然再生。具有外伤性关节软骨损伤且反复出现强烈的疼痛和/或关节水肿时，进行内服止痛药的治疗和/或透明质酸的关节内注射，但是这些治疗方法均是对症疗法，不是根本的治疗方法。因此，作为现在的常见的治疗方法，采用外科再生关节软骨的方法。作为主要的外科治疗方法，已知非专利文献1记载的骨穿孔法和自体骨软骨移植术。

非专利文献1的骨穿孔法是使用钻对软骨损伤部的骨打孔，使从骨髓出血，将骨髓中含有的间充质干细胞(MSC:Mesenchymal Stem Cell)诱导至损伤部，期待软骨和类似于软骨的组织再生的方法。由于不牺牲自身的组织，且能够在关节镜观察下简便实施，因此，目前为止作为软骨损伤的首选治疗法在世界范围内广泛进行。

此处，干细胞是具有自我复制能力和分化能力的细胞。作为这类干细胞，例如已知有胚胎干细胞(ES细胞)、诱导多能干细胞(iPS细胞)、和成体干细胞等。作为上述成体干细胞，例如有造血干细胞、神经干细胞和间充质干细胞等。上述ES细胞和上述iPS细胞具有能够向所有组织分化的多分化能力。上述造血干细胞具有向血液细胞分化的能力，上述神经干细胞具有向神经细胞分化的能力。另外，上述间充质干细胞存在于骨髓等组织中，作为具有向脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞等分化的多分化能力的干细胞而被熟知。

非专利文献1的自体骨软骨移植术是从自体关节软骨的健康部以圆柱状切去一块骨和软骨并自体移植(Auto graft)至损伤部的方法，虽然能够利用移植的透明软骨和其间隙的纤维性软骨进行修复，但是存在对健康部组织造成损伤和移植面积受到限制的缺点。

另外，作为关节软骨损伤的其他外科治疗法，已知有自体培养软骨移植术。自体培养软骨移植术是Brittberg等于1994年报告的方法，其是从患者自体的非负荷部的膝关节软骨采取少量的软骨组织，将分离和单层培养的软骨细胞移植于软骨损伤部的方法。

作为关节软骨损伤的另一外科的治疗法，已知专利文献1记载的利用人组织工程(Tissue engineering)的治疗方法。该治疗方法中，将软骨细胞或干细胞等细胞源与支架材料组合移植至关节软骨损伤部位，促进关节软骨的再生。

另外，在大阪大学医学部附属医院实施的人干细胞临床研究“针对关节软骨病变的自身滑膜间充质干细胞来源三维人工组织治疗法”(2012年1月25日获得计划审批)，将外伤性膝软骨损伤患者作为对象。该临床研究是将从关节内组织分离的滑膜干细胞进行培养，给予生物学的刺激而得到立体的组织片后，将其移植至软骨损伤部位的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:国际公开第2005/012512号小册子(2005年2月10日公开)

非专利文献

非专利文献1:整形外科Knack&Pitfalls膝关节外科的要点和盲点，黑坂昌弘，2005

发明内容