[发明专利]AAV载体和用于抗AAV（腺相关病毒）中和抗体的检测

说明书

相关申请信息

本申请要求2013年7月12日提交的美国临时申请序列 No.61/845841的名称为“AAVVECTORANDASSAYFORANTI-AAV (ADENO-ASSOCIATEDVIRUS)NEUTRALIZINGANTIBODIES”的优先 权，该申请的全部内容在此通过引用明确地并入本文。

背景技术

抗腺相关病毒(AAV)载体的体液免疫是血管内基因转移的重要 屏障，导致在载体进入靶细胞之前将其清除。针对AAV衣壳的抗体在人体 (该病毒的天然宿主)中是非常普遍存在的，并且由于衣壳蛋白质序列的同 源性程度而与许多血清型交叉反应。结果，当载体被导入血流中时甚至相对 低滴度的中和抗体(NAb)可阻断AAV转导。相反地，AAV载体向眼、脑 的基因转移或直接肌内递送似乎对NAb中和比较不敏感。

抗AAV的NAb存在于滑液(SF)中并且具有以血清型依赖性的 方式抑制载体介导的转导的潜力。然而，SF中抗不同血清型的NAb水平和 血清中的抗AAVNAb滴度与SF之间的关系是鲜为人知的。最后，因为NAb 可有效地阻断体内AAV介导的转导，所以克服抗病毒衣壳的体液免疫的策略 对于实现成功的基因转移而言是非常重要的。

发明内容

本文公开的是病毒载体、病毒颗粒以及筛选、分析和测定病毒抗 体的量或中和样品的抗体活性的方法和用途。这样的病毒载体、病毒颗粒以 及方法和用途可用于许多病毒类型，例如慢病毒、腺病毒和腺相关病毒 (AAV)血清型。使用不同的病毒载体、病毒颗粒和抗体筛选方法和用途， 可筛选、检测、分析和测定抗病毒免疫球蛋白质(g)，例如IgG、IgA、 IgM、IgE、IgD以及量。

该筛选、检测、分析或测定量的结果可用于使用慢病毒、腺病毒 和腺相关病毒(AAV)血清型测定受试者的适宜性，或用于基因治疗的载体 类型或剂量(以取代或补充缺陷或缺失基因或者剔除或敲除缺陷或不希望有 的基因的表达)。例如，如果受试者表达很少的或不表达抗特定病毒血清型 例如AAV血清型2(AAV2)的抗体，那么受试者将是AAV2介导的基因疗 法的合适的候选者。如果受试者表达抗特定病毒血清型例如AAV2的中等量 或大量抗体时，那么对于AAV2介导的基因疗法而言，受试者可能需要更大 剂量或更多个剂量的AAV2载体，或与药理学调节的B细胞应答的药剂或方 法相组合。受试者的基因转移因此可实现，否则对于病毒载体基因转移疗法 而言其不是理想的候选者。替代地，如果是可用的，则非AAV2载体(例如 另一个AAV血清型)可用于这样的受试者的基因治疗。因此，基于所存在的 病毒抗体(如果有的话)的存在或不存在、类型和/或量(例如滴度)，以及 基于受试者中病毒抗体的存在、类型和量针对给定的受试者所选的载体，病 毒载体施用可以个体化。

根据本发明，提供了重组AAV载体序列，所述载体序列包括报 告转基因。在一个实施方式中，重组AAV载体序列包括报告转基因，其中报 告转基因包括(a)单链或自身互补的基因组，(b)可操作地连接在一个或 更多个表达调控元件上，以及(c)侧翼为一个或更多个侧翼元件。

根据本发明，还提供了重组AAV载体，其中所述载体包括报告 转基因。在一个实施方式中，重组AAV载体包括报告转基因，其中报告转基 因包括(a)单链或自身互补的基因组，(b)可操作地连接在一个或更多个 表达调控元件上，以及(c)侧翼为一个或更多个侧翼元件。在具体的实施方 式中，所述重组AAV载体包括感染性重组AAV颗粒。