[发明专利]AAV载体和用于抗AAV（腺相关病毒）中和抗体的检测

权利要求书

1.一种重组AAV载体序列，其中所述载体序列包括报告转基因，其中 所述报告转基因包括(a)单链或自身互补的基因组，(b)能操作地连接在 一个或更多个表达调控元件上，以及(c)侧翼为一个或更多个侧翼元件。

2.一种重组AAV载体，其中所述载体包括报告转基因，其中所述报告 转基因包括(a)单链或自身互补的基因组，(b)能操作地连接在一个或更 多个表达调控元件上，以及(c)侧翼为一个或更多个侧翼元件，其中所述重 组AAV载体包括感染性重组AAV颗粒。

3.一种用于分析或检测或测量结合AAV的抗体的方法，其包括：

(a)提供使重组载体衣壳化的感染性重组AAV颗粒，其中

(i)所述载体包括报告转基因，

(ii)所述报告转基因包括单链或自身互补的基因组，和

(iii)所述报告转基因能操作地连接在一个或更多个表达调控元件 上并且侧翼为一个或更多个侧翼元件；

(b)提供来自受试者的生物样品以用于分析或检测结合AAV的抗 体；

(c)提供能感染所述感染性重组AAV颗粒的细胞；

(d)使(a)的所述感染性重组AAV颗粒与(b)的所述生物样品接 触或孵育，从而产生所得的混合物(M)；

(e)在其中(a)的所述感染性重组AAV颗粒能在所述细胞中感染并 表达所述报告转基因的条件下使(c)的所述细胞和所得的混合物(M)接 触；

(f)测量所述报告转基因的表达；以及

(g)将(f)的所述报告转基因表达与对照的报告转基因表达进行比 较，所述对照或者阴性(-)对照(i)缺乏结合AAV的抗体，或(ii)含有 预定量的结合AAV的抗体，从而分析或检测或测量结合AAV的抗体。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞包括哺乳动物细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞提供编码用于AAV复制 和/或基因组整合的辅助功能的核酸序列。

6.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞能感染AAV颗粒，所述 AAV颗粒包括与AAV血清型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、 AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、Rh74或 Rh10，或任何前述AAV血清型的杂合体或嵌合体的VP1、VP2或VP3序列 具有90％或更高同一性的VP1、VP2或VP3序列。

7.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞能感染AAV血清型 AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、 AAV10、AAV11、AAV12、Rh74或Rh10，或任何前述AAV血清型的杂合 体或嵌合体。

8.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞包括哺乳动物细胞。

9.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞包括HEK-293、CHO、 BHK、MDCK、10T1/2、WEHI细胞、COS、BSC1、BSC40、BMT10、 VERO、WI38、MRC5、A549、HT1080、293、B-50、3T3、NIH3T3、 HepG2、Saos-2、Huh7、HER、HEK、HEL或HeLa细胞。

10.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞表达AAVE4基因。

11.根据权利要求3所述的方法，其中所述细胞包括2V6.11细胞。

12.根据权利要求1或2所述的AAV载体或权利要求2所述的方法，其 中所述报告转基因编码提供酶、比色、荧光、发光、化学发光或电化学信号 的蛋白质。

13.根据权利要求1或2所述的AAV载体或权利要求2所述的方法，其 中所述报告转基因包括荧光素酶基因。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述荧光素酶基因包括海肾荧光 素酶或萤火虫萤光素酶基因。