[发明专利]微流体协同酶增强反应性CEER免疫测定法

说明书

背景技术

传统上对大量患者的流行病学研究没有考虑到给定的人群中每个个体 的遗传变异性。这导致特定的药物或治疗剂对一些个体十分有效，但对其 他个体不十分有效。个性化医疗的目标是确保给定的药物以正确的剂量给 予正确的个体。

可使用各种生物标志物如基因、SNP、酶活性、蛋白质表达和活化以 及它们对代谢途径的影响，来开发治疗剂的优化策略。相关生物标志物的 鉴别可被用来开发可用于了解药物功效和副作用风险的诊断测定法。选择 适当的剂量或给药方案，对于优化患者的响应和使患者的风险最小化可能 是十分重要的。

适当生物标志物的鉴别，是用于个性化医疗的诊断测定法和试剂盒的 开发中的重要的第一步。一旦鉴别了生物标志物，可验证其存在或不存 在，然后使用诊断测试进行定量或测量。在某些情况中，使用护理点(point- of-care)方法，其中在可进行医疗测试和/或治疗的患者护理场所之处或附近 的位置进行该测定法。例如，护理点的位置可包括但不限于医院、患者家 庭、医师办公室或急诊场所。

在护理点快速诊断医学病症、选择适当的疗法或优化剂量的好处具有 许多优点。使药物、剂量和治疗方案个性化，意味着患者具有得益于现代 医学的最佳机会。本领域需要新的方法来使用护理点装置鉴别和测量对患 者具有临床好处的生物标志物。本发明满足这个需求及其他需求。

发明内容

在一个实施例中，本发明提供一种用于对样品进行多重免疫测定法如 微流体协同酶增强反应性(CEER)免疫测定法的方法，如体外方法。该方法 包括：

(a)使细胞裂解物与附着于编码的微载体的、对至少一种被分析物具 有特异性的多个捕获抗体接触，以形成多个捕获的被分析物。

(b)使该多个捕获的被分析物与至少两种类型的对相应的被分析物具 有特异性的检测抗体接触，其中，至少一种类型的检测抗体具有 信号放大对的第一成员，以形成多个可检测的捕获的被分析物；

(c)使该多个可检测的捕获的被分析物与该信号放大对的第二成员接 触，以产生放大的信号；并且

(d)检测从该信号放大对的第一和第二成员产生的放大的信号。

在一些实施例中，编码的微载体由选自以下的材料制成：乳胶、聚苯 乙烯、交联葡聚糖、聚甲基苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯、纤维素、聚丙烯 酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、氟化乙烯-丙烯、玻璃、SiO₂、硅、PMMA(聚 甲基丙烯酸甲酯)、金、银、铝、钢和SU-8。在一个实施例中，编码的微 载体由硅制成。

在一些实施例中，编码的微载体被成形为选自以下的成员：球体、薄 片体、正方体、圆盘体、长方体、圆环体、三角体和六角体。在一个实施 例中，编码的微载体被成形为薄片体。

在一些实施例中，编码的微载体包括多个微载体。

在一些实施例中，该多个微载体具有至少两个群体。在一些情况中， 该至少两个群体的编码的微载体中的每一个群体具有不同的功能。在一个 情况中，具体的功能可通过该编码鉴别。

在一些实施例中，编码的微载体具有功能，该功能通过读取该编码进 行确定。在一些情况中，该编码呈该微载体中的穿越孔的构型的形式。在 另一个情况中，具体的功能是该多个捕获抗体的种类(identity)。

在一些实施例中，样品选自全血、血清、血浆、尿液、痰液、支气管 灌洗液、泪液、乳头抽吸物、淋巴液、唾液、脑脊髓液(CSF)、细针抽吸物 (FNA)及它们的组合。

在另一个实施例中，检测抗体包括：

(i)多个用促进部分(facilitatingmoiety)标记的活化状态非依赖性抗 体，和

(ii)多个用信号放大对的第一成员标记的活化状态依赖性抗体。

在一些方面，促进部分产生氧化剂，该氧化剂传送到(channelto)信号 放大对的第一成员并与该第一成员反应。在某些情况中，促进部分是葡萄 糖氧化酶。在某些方面，氧化剂是过氧化氢(H₂O₂)。在某些方面，信号放大 对的第一成员是过氧化物酶。在某些情况中，过氧化物酶是辣根过氧化物 酶(HRP)。

在某些方面，信号放大对的第二成员是酪胺(tyramide)试剂。在某些情 况中，酪胺试剂是生物素-酪胺。