[发明专利]采用非干扰性蛋白质染剂的HCP抗血清验证

权利要求书

1.一种验证免疫学检测试剂的方法，所述免疫学检测试剂包含多克隆抗体混合物，所述多克隆抗体混合物用于检测生物样品中的污染性宿主细胞蛋白(HCP)，所述方法包括：

提供包含HCP的生物样品；

通过尺寸和等电点分离所述HCP；

将已分离的HCP转移至膜，由此产生结合至膜的HCP；

采用非干扰性总蛋白质染剂对结合至膜的HCP染色，由此，用所述非干扰性总蛋白质染剂检测所述膜上的宿主细胞蛋白(HCP)位置；

观察并记录所述非干扰性总蛋白质染剂测得的该膜上的HCP位置；

将该膜与所述多克隆抗体混合物接触，由此，使来自多克隆抗体混合物的抗体与结合至该膜的HCP结合；

检测与该膜结合的来自所述多克隆抗体混合物的抗体，由此采用所述多克隆抗体混合物检测该膜上的HCP位置；

观察并记录所述多克隆抗体混合物测得的该膜上的HCP位置；和

将所述非干扰性总蛋白质染剂测得的HCP位置与所述多克隆抗体混合物测得的位置做比较，由此验证用于检测生物样品中的污染性宿主细胞蛋白HCP的所述多克隆抗体混合物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在使所述膜与所述多克隆抗体混合物接触之前，从所述膜基本移除所述非干扰性总蛋白质染剂。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，通过使所述膜与封闭溶液接触，来从所述膜基本移除所述非干扰性总蛋白质染剂。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述封闭溶液包含血清白蛋白、明胶或酪蛋白的缓冲溶液；血清或脱脂奶；或包含亲水性或两亲性合成聚合物的无蛋白封闭溶液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非干扰性总蛋白质染剂检测western印迹膜上包含至少约0.25ng到至少约1ng蛋白质的HCP位置。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非干扰性总蛋白质染剂包括金属有机螯合物。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述金属有机螯合物包含钌。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，该包含钌的金属有机螯合物是三(红菲绕啉)钌II的磺化衍生物。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述三(红菲绕啉)钌II的磺化衍生物是三(红菲绕啉二磺酸)钌II。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，该包含钌的金属有机螯合物是SYPRORuby蛋白质染剂。

11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非干扰性总蛋白质染剂包含阿扎菲酮，该阿扎菲酮与伯胺反应产生荧光化合物。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述阿扎菲酮是黑附球菌酮。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，观察该膜上的所述非干扰性总蛋白质染剂测得的HCP位置通过用电磁辐射照射该膜并检测荧光来进行。

14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，检测与该膜结合的来自所述多克隆抗体混合物的抗体包括：使所述膜与第二检测试剂接触，以检测结合的抗体。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述第二检测试剂是二抗。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述二抗是带标记的。

17.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述二抗标记有酶、荧光团、放射性同位素、生物素、亲和素或链酶亲和素。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述酶是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。

19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述荧光团是花青染料、DyLight染料、AlexaFluor染料、荧光纳米颗粒或荧光蛋白。

20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，观察该膜上的所述多克隆抗体混合物测得的HCP位置通过使所述膜与化学发光底物接触并记录化学发光来进行。

21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述膜还与化学发光增强剂接触。