[发明专利]不具有信号肽的天然分泌多肽的表达

权利要求书

1.一种重组生产天然分泌多肽的方法，该方法包括以下步骤：

a)提供一种微生物宿主细胞，该宿主细胞包括编码不具有翻译融合信号肽的天然分泌多肽的一种外源多核苷酸；

b)在有益于该多肽表达的条件下培养该微生物宿主细胞并且，可任选地，

c)回收该多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其中该微生物是原核宿主细胞，优选革兰氏阳性宿主细胞，更优选芽孢杆菌属宿主细胞，并且最优选地，该宿主细胞选自下组，该组由以下各项组成：嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该多肽是一种同源或异源酶，优选地该酶选自下组，该组由以下各项组成：水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶或转移酶；更优选地，该酶是一种α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、氨肽酶、淀粉酶、天冬酰胺酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-木糖苷酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、绿色荧光蛋白、葡聚糖转移酶、葡糖淀粉酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、变聚糖酶、氧化酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、或木聚糖酶。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该多肽是：

a)一种蛋白酶多肽，该多肽包括与SEQIDNO:8的位置1至413所示的序列至少80％相同的氨基酸序列或由其组成，或

b)一种木聚糖酶多肽，该多肽包括与SEQIDNO:15的位置1至204所示的序列至少80％相同的氨基酸序列或由其组成。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该多肽是：

a)由包括如下核苷酸序列或由其组成的多核苷酸编码的一种蛋白酶，该核苷酸序列与SEQIDNO:7的位置1至1569所示的序列至少80％相同；优选与SEQIDNO:7的位置331至1569所示的序列至少80％相同；或

b)由包括如下核苷酸序列或由其组成的多核苷酸编码的一种木聚糖酶，该核苷酸序列与SEQIDNO:14的位置1至612所示的序列至少80％相同。

6.一种重组微生物宿主细胞，该宿主细胞包括编码不具有翻译融合信号肽的天然分泌多肽的一种外源多核苷酸。

7.根据权利要求6所述的微生物，该微生物是原核宿主细胞，优选革兰氏阳性宿主细胞，更优选芽孢杆菌属宿主细胞，并且最优选地，该宿主细胞选自下组，该组由以下各项组成：嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌。

8.根据权利要求6或7所述的微生物，其中该多肽是一种同源或异源酶，优选地该酶选自下组，该组由以下各项组成：水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶或转移酶；更优选地，该酶是一种α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、氨肽酶、淀粉酶、天冬酰胺酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-木糖苷酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、绿色荧光蛋白、葡聚糖转移酶、葡糖淀粉酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、变聚糖酶、氧化酶、果胶分解酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、或木聚糖酶。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的微生物，其中该多肽是：

a)一种蛋白酶多肽，该多肽包括与SEQIDNO:8的位置1至413所示的序列至少80％相同的氨基酸序列或由其组成；或

b)一种木聚糖酶多肽，该多肽包括与SEQIDNO:15的位置1至204所示的序列至少80％相同的氨基酸序列或由其组成。