[发明专利]用于生产化学修饰的肝素的新方法

说明书

本发明涉及用于生产具有约4.6至约6.9kDa的平均分子量和小于约10IU/mg的抗因子Xa活性的肝素衍生物的方法，其包括氧化未分级肝素、解聚和还原所产生的末端基团的步骤。

技术领域

本发明涉及新方法。特别地，其涉及用于制备化学修饰的葡糖胺聚糖(glycosaminoglycan)(例如化学修饰的肝素)的新方法。

背景技术

本说明书中对明显在先出版的文献的列举或讨论不应必须理解为承认该文献是现有技术的一部分或是公知常识。

肝素是多分散的、天然存在的抑制凝血的多糖，血栓形成经由所述凝血过程发生。肝素由不同长度和分子量的无支链多糖链组成。分子量从5000至超过40,000道尔顿的链构成了医药级肝素。

通常，天然来源(例如猪肠或牛肺组织)的肝素可以在治疗上施用以预防和治疗血栓形成。然而，未分级肝素(unfractionated heparin)的作用是难以预料的。因此，在用未分级肝素治疗血栓形成期间，必须非常密切地监测凝血参数以防止过强或过弱抗凝血。

众多品牌的肝素和低分子量肝素(LMWH)(例如达肝素(dalteparin)和依诺肝素)可以用于依赖于其抗凝血活性的治疗方法。大量体外和动物实验研究，甚至临床试验都表明，肝素及其衍生物具有与其抗凝血作用相关的那些特性之外的有益特性。然而，由于与抗凝血作用相关的出血风险，现有的肝素和LMWH不适合用于治疗其它医学病症。

已证明LMWH达肝素减少接受预防深静脉血栓形成的女性中的滞产(protractedlabour)。该机制被认为涉及达肝素诱导的增加的白介素水平，导致有利的炎症反应，其促进子宫颈成熟。此外，已证明达肝素增加子宫的收缩力(Acta Obstetricia etGynecologica,2010；89:147-150)。然而，出于一些原因，肝素和LMWH不适合用于预防或治疗这样的疾病。

首先，肝素和LMWH具有显著的、众所周知的抗凝血作用，由于出血风险，限制其在妊娠晚期及分娩过程中使用(无论是预防还是急性使用)。例如，当给予硬膜外麻醉时(在分娩时经常采取的措施)，严格禁止使用达肝素。

第二，肝素(以及在一定程度上LMWH)已与肝素诱导的血小板减少联系起来，所述血小板减少是可以发生在任何暴露于肝素的病人中的严重的免疫介导药物反应。其是由肝素依赖性抗体引起的潜在破坏性血栓形成前(pro-thrombotic)疾病，所述肝素依赖性抗体是在病人使用肝素五天或以上之后，或者如果病人之前已经有肝素暴露而发展起来的。

肝素长期治疗的另一种可能的不良影响是，其可能会诱导骨骼脱矿质(demineralization)，并造成骨质疏松。

已经有许多尝试，以消除或降低肝素或低分子量肝素的抗凝血活性，以提供低抗凝血肝素(LAH)，其目的在于从肝素链的抗凝血作用之外的其它潜在临床作用中获益，而不具有与肝素有关的不良作用的风险(主要是出血)。然而，对于这种类型的肝素的临床经验有限，至今没有这样的产品被允许用于临床。

肝素主要通过高亲和力结合并活化丝氨酸蛋白酶抑制剂，抗凝血酶(AT)，而发挥其抗凝血活性。AT作为血液凝固的重要生理抑制剂，通过与激活的凝血因子形成稳定的络合物而中和这些因子。特定的五糖(pentasaccharide)与肝素的多糖链的结合引起AT的构象变化，这极大地提高了抑制凝血因子的速率，从而减弱血液凝固和血凝块的形成。

欧洲专利申请EP 1 059 304公开了酶促降解的或氧化的肝素，得到具有低抗凝血作用的产品，其具有9至13kDa的平均分子量，其被推荐用于神经变性疾病的治疗。