[发明专利]细菌肝素前体-葡萄糖醛酸-5-差向异构酶以及使用其的多糖的制造方法

权利要求书

1.一种源自非洲大蜗牛的酶，其具有以下的(A)～(C)的特征：

(A)具有将N-乙酰基细菌肝素前体的葡萄糖醛酸残基异构化为艾杜糖醛酸残基的活性和/或将完全脱硫酸化·N-乙酰化肝素的艾杜糖醛酸残基异构化为葡萄糖醛酸残基的活性；

(B)实质上不具有将N-硫酸化细菌肝素前体的葡萄糖醛酸残基异构化为艾杜糖醛酸残基的活性和/或将完全脱硫酸化·N-再硫酸化肝素的艾杜糖醛酸残基异构化为葡萄糖醛酸残基的活性；

(C)所述酶由以下的(c1)或(c2)的氨基酸序列组成，

(c1)序列号2中的氨基酸编号1～601所示的氨基酸序列，

(c2)序列号2中的氨基酸编号34～601所示的氨基酸序列。

2.一种多肽，其为选自以下的(A)或(B)的组：

(A)由以下的(a1)或(a2)的氨基酸序列组成的多肽，

(a1)序列号2中的氨基酸编号1～601所示的氨基酸序列，

(a2)序列号2中的氨基酸编号34～601所示的氨基酸序列；

(B)由向所述(A)的多肽添加了肽标签的融合多肽的氨基酸序列组成，且具有将N-乙酰基细菌肝素前体的葡萄糖醛酸残基异构化为艾杜糖醛酸残基的活性和/或将完全脱硫酸化·N-乙酰化肝素的艾杜糖醛酸残基异构化为葡萄糖醛酸残基的活性的多肽。

3.一种多肽，其具有以下的(A)～(D)的特征：

(A)具有将N-乙酰基细菌肝素前体的葡萄糖醛酸残基异构化为艾杜糖醛酸残基的活性和/或将完全脱硫酸化·N-乙酰化肝素的艾杜糖醛酸残基异构化为葡萄糖醛酸残基的活性；

(B)最适pH为5.5～6.0；

(C)在0.1％(w/v)以上的脱氧胆酸钠的存在下，实质上失去所述活性；

(D)所述多肽由以下的(d1)或(d2)的氨基酸序列组成，

(d1)序列号2中的氨基酸编号1～601所示的氨基酸序列，

(d2)序列号2中的氨基酸编号34～601所示的氨基酸序列。

4.一种核酸，其对权利要求1所述的酶、或权利要求2或3所述的多肽进行编码。

5.一种DNA，其为选自以下的(A)或(B)的组：

(A)由以下的(a1)或(a2)的碱基序列组成的DNA，

(a1)序列号1中的碱基编号1～1806所示的碱基序列，

(a2)序列号1中的碱基编号100～1806所示的碱基序列；

(B)由向所述(A)的DNA中添加了编码肽标签的DNA的融合DNA的碱基序列组成，且对具有将N-乙酰基细菌肝素前体的葡萄糖醛酸残基异构化为艾杜糖醛酸残基的活性和/或将完全脱硫酸化·N-乙酰化肝素的艾杜糖醛酸残基异构化为葡萄糖醛酸残基的活性的多肽进行编码的DNA。

6.一种载体，其含有权利要求4所述的核酸和/或权利要求5所述的DNA。

7.一种宿主细胞，其具有权利要求4所述的核酸、权利要求5所述的DNA和/或权利要求6所述的载体。

8.一种多肽的制造方法，其包括以下的(A)和(B)：

(A)使用权利要求7所述的宿主细胞，对具有将N-乙酰基细菌肝素前体的葡萄糖醛酸残基异构化为艾杜糖醛酸残基的活性和/或将完全脱硫酸化·N-乙酰化肝素的艾杜糖醛酸残基异构化为葡萄糖醛酸残基的活性的多肽进行表达的工序；

(B)收集在所述(A)的工序中所表达的多肽的工序。

9.一种多肽，其是通过权利要求8所述的方法得到的。