[发明专利]产生肾前体细胞的方法及含有肾前体细胞的药物

说明书

技术领域

本发明涉及一种由多能干细胞诱导分化肾前体细胞的方法。本发明还涉及一种含有这样得到的肾前体细胞的肾病治疗剂。

背景技术

肾脏为通过将由生物体内的代谢活动产生的有害物质等废物从血液中过滤而除去以谋求维持身体的健康而起作用的重要的器官之一。作为肾脏的疾病，可列举肾功能不全等，作为治疗方法，可列举人工透析。但是，由于该治疗中需要的医疗费用负担大，因此，不仅从医学方面、而且从医疗经济面考虑，都依然为世界性问题。另外，作为其他治疗方法，可列举肾移植，但却是极其严重的供体器官不足状态。

另一方面，迄今为止，报导了通过向胚胎干细胞(ES细胞)或体细胞导入未分化细胞特异性的基因而得到的诱导性多能干细胞(iPS细胞)等具有多能性的细胞(专利文献1及2)。因此，作为肾功能不全的治疗方法，研究了将由这些多能干细胞诱导分化成的肾细胞进行移植的治疗方法。进而，使用来自这些多能干细胞的均一的肾细胞进行治疗药物的开发也映入视野。

哺乳动物的肾脏经过前肾、中肾、后肾的3个阶段而形成，其中，已知后肾在间介中胚层的后方区域生成。迄今为止，研究了由小鼠多能干细胞向间介中胚层的诱导分化方法用于肾形成(非专利文献1)，作为间介中胚层的特征标记物，确认有OSR1。另外，使用细菌人工染色体(BAC)载体将绿色荧光蛋白(GFP)基因通过与内源性OSR1等位基因的同源重组而导入，制备了人iPS细胞(OSR1-GFP报告基因人iPS细胞)，通过使用该细胞的研究，在使用激活素A、Wnt、BMP及各种低分子化合物的由人多能干细胞向间介中胚层的诱导分化方面取得了成功(非专利文献2、专利文献3)。

考虑针对肾组织的移植时，优选诱导来自间介中胚层并进一步向肾脏进行分化的肾前体细胞，作为对肾前体细胞赋予特征的因子之一，已知有SIX2(非专利文献4)。但是，迄今为止，由间介中胚层向肾前体细胞人工诱导的方法没有被确立。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利第5,843,780号

专利文献2：国际公开第WO2007/069666号

专利文献3：国际公开第WO2012/011610号

非专利文献

非专利文献1：MaeS，etal.(2010)，BiochemBiophysResCommun.393：877-82

非专利文献2：MaeS，etal.(2013)，NatCommun.4：1367

非专利文献3：OsafuneK，etal.(2006)，Development.133：151-61

非专利文献4：KobayashiA，etal.(2008)，CellStemCell.3：169-81

发明内容

本发明的课题在于，提供一种由间介中胚层细胞诱导分化肾前体细胞的方法。更具体而言，提供一种由间介中胚层细胞诱导分化肾前体细胞的方法，所述方法包括将由多能干细胞诱导成的间介中胚层细胞进一步诱导分化为肾前体细胞的工序。

本发明人等为了解决上述的课题进行了深入研究，结果最初发现：通过在含有TGFβ信号激活剂及BMP抑制剂的培养基中进行培养，可由间介中胚层细胞诱导分化肾前体细胞。本发明是基于这样的见解而完成的。

即，本发明具有以下的特征：

[1]一种由间介中胚层细胞产生肾前体细胞的方法，所述方法包括：将间介中胚层细胞在含有TGFβ信号激活剂及BMP抑制剂的培养基中进行培养，由间介中胚层细胞诱导肾前体细胞的工序。

[2]如[1]所述的方法，其中，所述肾前体细胞为SIX2阳性细胞。

[3]如[1]或[2]所述的方法，其中，所述间介中胚层细胞为OSR1阳性细胞。

[4]如[1]～[3]中任一项所述的方法，其中，所述TGFβ信号激活剂为选自由TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、IDE1及IDE2构成的组中的1种以上的物质。

[5]如[1]～[4]中任一项所述的方法，其中，所述BMP抑制剂为选自由Dorsomorphin(ドルソモルフィン)、头蛋白(Noggin)、LDN193189及DMH1构成的组中的1种以上的物质。

[6]如[1]～[3]中任一项所述的方法，其中，所述TGFβ信号激活剂为TGFβ1，所述BMP抑制剂为DMH1。

[7]如[1]～[6]中任一项所述的方法，其中，所述间介中胚层细胞为由多能干细胞诱导成的间介中胚层细胞。