[发明专利]通过原位杂交区分瞬时高危型HPV感染和持续高危型HPV感染

说明书

本申请要求2013年3月28日申请的美国临时申请序列号61/806,360的优先权的权益，该临时申请的全部内容通过引用并入本文作为参考。

发明背景

本发明总的来讲涉及原位杂交测定(insituhybridizationassays)和宫颈样品分析，更准确地讲涉及用于测试人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染的测定及宫颈组织样品的分析。

高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染引起基本上所有宫颈癌和一部分头颈部癌(ZurHausen,Virology384:260–265(2009))。然而，仅有HPV感染对于致癌性转化是不够的；80-90％的感染是瞬时的并且被免疫系统自我清除。目前的HPV检验方法如Hybrid2(DigeneCorporation；Gaithersburg,MD)和GP5+/6+PCR虽然具有极好的分析灵敏度但是无法将瞬时HPV感染与持续HPV感染区分开，而仅仅报告HPV阳性(Kroupis和Vourlidis,Clin.Chem.Lab.Med.49:1783-1799(2011))。结果，这些检验对于高级别上皮内瘤变(CIN2+)的临床特异性差(40-50％)，从而对许多妇女造成不必要的随访程序(Kinney等人,Am.J.Clin.Pathol.134:193–199(2010))。因此，对于既有分析灵敏度又有临床特异性的HPV测定法有未满足的需求。

因此，基于HPV核酸的存在来准确地评价宫颈组织样品并将其分类的方法存在需求。本发明满足了这一需求并且也提供了相关优势。

发明概述

本发明涉及将宫颈组织或细胞学样品分类的方法，即通过使用反义E6或E7探针在宫颈组织样品上进行原位杂交测定，其中反义E6或E7探针能同时检测HPVDNA和HPVRNA；检测HPV核酸的存在；和基于HPV核酸表达将宫颈组织样品分类。

附图简述

图1显示培养的Caski细胞的福尔马林固定石蜡包埋蜡块(formalin-fixedparaffin-embeddedblock)的系列切片。Caski细胞对于编码遍在蛋白(ubiquitin)的UBC(内源RNA对照)(左栏)、针对HPV16E6/E7mRNA的反义探针(中栏)和针对HPV16E6/E7DNA的有义探针(右栏)染色。上面一排，标准条件(无DNase)。下面一排，切片用DNase预处理后与HPV探针杂交。染色信号呈棕褐色(DAB)。细胞核用苏木精染色(蓝色)。

图2显示在正常宫颈和不同组织学级别的HPV相关宫颈病变中的HPVE6/E7染色图案(patterns)。使用针对18种亚型(16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82)的一组探针，将宫颈活检样品对于高危型HPVE6/E7染色。正常宫颈对于高危型HPV呈完全阴性。注意到CIN1在宫颈上皮层的上1/3中具有强染色，但是其染色图案与CIN3的不相同，在整个上皮，信号似乎为细棕褐色颗粒。一些CIN2表现出如图所示的中间图案。染色信号呈棕褐色(DAB)。细胞核用苏木精染色(蓝色)。

图3显示用靶向高危型HPV的反义探针或相应有义探针染色的CIN2病变。染色信号呈棕褐色(DAB)。细胞核用苏木精染色(蓝色)。

图4显示用靶向高危型HPV的反义探针或相应有义探针染色的CIN2病变。上面一排，20x透镜；下面一排，40X透镜。信号呈棕褐色(DAB)。细胞核用苏木精染色(蓝色)。

图5显示与图3中用RNase消化预处理后用靶向高危型HPV的反义探针或相应有义探针染色的病变相同的CIN2病变。上面一排，20x透镜；下面一排40X透镜。信号呈棕褐色(DAB)。细胞核用苏木精染色(蓝色)。

图6显示与图3中用DNase预处理后用有义HPV探针染色的病变相同的CIN2病变。左，20x透镜；右，40X透镜。信号呈棕褐色(DAB)。细胞核用苏木精染色(蓝色)。

图7显示宫颈上皮各层的示意图。

发明详述